系統(tǒng)性硬化癥患者骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞的生物學(xué)特性.pdf

1、研究目的
　　 建立SSc患者骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞（MSC）體外分離擴(kuò)增的方法，并初步研究SSc患者骨髓MSC的一般生物學(xué)特性和免疫調(diào)節(jié)功能。
　　 研究方法：通過密度梯度離心和貼壁篩選法從SSc患者和對(duì)照骨髓中分離MSC，從形態(tài)、表面標(biāo)志和多向分化潛能等方面進(jìn)行鑒定，通過描繪生長曲線，流式細(xì)胞術(shù)PI染色檢測細(xì)胞周期研究其生長特性。通過混合淋巴細(xì)胞反應(yīng)和淋巴母細(xì)胞轉(zhuǎn)化實(shí)驗(yàn)研究SSc患者M(jìn)SC的免疫調(diào)節(jié)功能，用RT-PCR方法

2、檢測MSC免疫相關(guān)因子的表達(dá)。
　　 研究結(jié)果
　　 1.通過密度梯度離心和貼壁篩選法從骨髓中分離出紡綞狀形態(tài)均一的MSC，SSc患者骨髓MSC擴(kuò)增能力有限，傳代6次以后逐漸衰老。
　　 2.流式細(xì)胞術(shù)檢測MSC表面標(biāo)志：CD34、CD45、CD31、CD83、CD80、HLA-DK（-），CD166、CD73、CD105、CD90、HLA-ABC（+），SSc患者M(jìn)SC表型與對(duì)照無明顯差異，與培養(yǎng)條件有關(guān)。經(jīng)分

3、選的細(xì)胞純度達(dá)90％以上。
　　 3.流式檢測細(xì)胞周期顯示：SSc患者骨髓MSC90％以上處于G0/G1期，在傳代過程中無明顯改變，與對(duì)照無明顯差異，符合干細(xì)胞的特性。
　　 4.SSc患者和對(duì)照MSC在特定誘導(dǎo)條件下均能分化為骨、脂肪等間質(zhì)細(xì)胞。一些SSc患者表現(xiàn)出更強(qiáng)的成骨分化傾向。
　　 5.SSc患者和對(duì)照MSC在一定條件下均能輕度刺激異基因T細(xì)胞增殖，而抑制有絲分裂原引起的T細(xì)胞增殖，呈劑量依賴性，隨M

4、SC濃度增加而明顯。
　　 6.SSc患者M(jìn)SC在mRNA水平表達(dá)免疫調(diào)節(jié)相關(guān)因子，觀察到部分患者M(jìn)SC的巨噬系集落刺激因子（M-CSF）和轉(zhuǎn)化生長因子β1（TGF-β1）表達(dá)水平有所降低。
　　 研究結(jié)論
　　 1.SSc患者骨髓中能分離擴(kuò)增出純度較高的MSC，體外可傳代6次以上，傳代過程中能保持干細(xì)胞的生物學(xué)特性。
　　 2.SSc患者骨髓MSC具有多向分化潛能，部分患者表現(xiàn)出成骨分化傾向。