高脂、高同型半胱氨酸血癥加球囊損傷致兔動脈粥樣硬化及?；撬?葉酸干預的實驗研究.pdf

1、目的：分析高脂血癥、高同型半胱氨酸(hyperhomocysteinemia，HHcy)血癥及球囊損傷三種因素單獨或疊加之后在兔動脈粥樣硬化(atherosclerosis, As)形成過程中的作用。通過觀察各組兔 As形成的病理生理過程、病理解剖形態(tài)、病理組織學、超微病理結構改變及相關因子的表達，比較?；撬岷蛡鹘y(tǒng)藥物葉酸干預對兔高脂血癥、HHcy血癥及As的作用方式和差異，進一步充實和完善相關基礎理論，為As防治提供新的依據。

2、　　方法：1、將56只新西蘭大耳白兔隨機分成7組，即：正常對照組(n=8)，予普通家兔顆粒飼料喂養(yǎng)；損傷對照組(n=8)，予普通顆粒飼料喂養(yǎng)；蛋氨酸組(n=8)，予2％蛋氨酸顆粒飼料喂養(yǎng)；高脂組(n=8)，予高脂顆粒飼料喂養(yǎng)；模型組(n=8)，予高脂顆粒飼料+2％蛋氨酸顆粒飼料喂養(yǎng)；葉酸組(n=8)，予2％蛋氨酸+高脂顆粒飼料喂養(yǎng)，同時給予葉酸片5mg/d；牛黃酸組(n=8)，予2％蛋氨酸+高脂+1％?；撬犷w粒飼料喂養(yǎng)。各組實驗周期均為

3、12周，除正常對照組外，其它各組均在2周后采用球囊損傷兔腹主動脈。
　　2、實驗0、2、12周時采血化驗TG、Tc、LDL-c、HDL-c、Hcy、Ox-LDL、MMP-9、VCAM-1.
　　3、12周后處死兔子，分離腹主動脈后截取新鮮組織做冰凍切片樣本、透射電鏡樣本和組織勻漿樣本，半定量檢測組織中的MMP-9、NFKB；再截取組織標本用10％中性福爾馬林液固定24小時后脫水、透明、浸蠟、石蠟包埋，切片后進行 H.E.染色

4、，堿性品紅染色，VCAM-1，NFKB免疫組化染色；剩余組織用來做血管整體油紅O染色。
　　4、圖像采用Image-pro plus專業(yè)分析軟件處理。
　　結果：1、血脂和Hcy的情況：2周后與正常對照組比較，高脂組、模型組、葉酸組、?；撬峤M兔血清TG、Tc、HDL-c、LDL-c測值顯著升高(P<0.05)，與12周后各組的水平無顯著差異（P>0.05）；2周后模型組和牛磺酸組的Hcy水平比正常對照組顯著升高(P<0.05

5、)，葉酸組Hcy水平較低，與模型組比較具有顯著性(P<0.05)，12周后各組Hcy水平與2周后的水平比較無明顯變化（P>0.05）。
　　2、各組兔腹主動脈粥樣斑塊形成情況：葉酸組兔腹主動脈粥樣斑塊面積較模型組無顯著減少(P>0.05)；牛磺酸組兔腹主動脈粥樣斑塊面積較模型組顯著減少(P<0.05)。
　　3、各組兔腹主動脈病理切片改變：葉酸組兔腹主動脈內膜/內中膜厚度百分比無顯著減少(P>0.05)；?；撬峤M兔腹主動脈內

6、膜/內中膜厚度百分比顯著降低（P<0.05)。
　　4、各組兔腹主動脈脂肪浸潤情況：葉酸組兔腹主動脈脂肪浸潤與模型組比較無顯著性減輕（P>0.05)；?；撬峤M兔子腹主動脈脂肪浸潤比模型組顯著減輕（P<0.05)。
　　5、各組兔腹主動脈彈力纖維改變：葉酸組兔腹主動脈彈力纖維改變與模型組比較無顯著差異；?；撬峤M兔彈力纖維增生較模型組明顯減少，且無彈力纖維和內彈力板變性壞死、斷裂溶解現(xiàn)象。
　　6、各組兔腹主動脈電鏡下改變

7、：模型組兔腹主動脈平滑肌細胞線粒體和內質網顯著增生，線粒體線粒體膜及嵴結構破壞，腫脹呈空泡狀，溶酶體吞噬脂肪，細胞核皺縮，染色質邊集；葉酸組以上病變無明顯減輕；?；撬峤M病變顯著減輕。
　　7、各組兔血清動脈粥樣硬化相關因子的測量：與模型組比較，葉酸組Ox-LDL無顯著降低(P>0.05)，而?；撬峤M兔血清Ox-LDL降低具有顯著性（P<0.05）；各組兔子血清MMP-9，VCAM-1均無顯著性差異（P>0.05）。
　　8、

8、半定量檢測各組兔腹主動脈組織勻漿中MMP-9、NFKB水平：與模型組比較，葉酸組兔組織勻漿中MMP-9、NFKB無顯著降低(P>0.05)，而?；撬峤M兔子組織勻漿MMP-9、NFKB降低具有顯著性（P<0.05）；各組MMP-9與NFKB值呈正相關（r=0.89）。
　　9、各組兔腹主動脈血管細胞間粘附分子-1表達情況：葉酸組兔VCAM-1陽性細胞百分比較模型組無顯著差異（P>0.05）；?；撬峤MVCAM-1陽性細胞百分比較模型組

9、明顯降低(P<0.05)。
　　10、各組兔腹主動脈核轉錄因子KB表達情況（DAB顯色×100）：葉酸組兔NFKB陽性細胞百分比較模型組無顯著差異（P>0.05）；?；撬峤MNFKB陽性細胞百分比較模型組明顯降低(P<0.05)。
　　結論：1、采用高脂顆粒飼料喂養(yǎng)新西蘭大耳白兔2周可形成高脂血癥，采用高蛋氨酸顆粒飼料喂養(yǎng)新西蘭大耳白兔2周可形成高同型半胱氨酸血癥，且其高度與喂養(yǎng)12周時程度相當。
　　2、高脂血癥、高H