吡格列酮對高同型半胱氨酸血癥誘發(fā)動脈硬化早期斑塊的干預(yù)研究.pdf

1、背景和目的：高同型半胱氨酸血癥(hyperhomocysteinemia，HHcy)是動脈粥樣硬化的獨立危險因素。但是到目前為止，臨床上尚無有效的防治措施。近年來研究發(fā)現(xiàn)，HHcy大鼠經(jīng)過氧化物酶體增殖體激活物受體-γ(peroxisome proliferator-activated receptor-γ，PPAR-γ)激動劑治療，頸動脈球囊損傷后的中膜平滑肌細(xì)胞增殖及內(nèi)膜增生現(xiàn)象明顯改善。但是上述研究僅局限于急性球囊損傷過程中，PP

2、AR-γ激動劑(如吡格列酮)在HHcy導(dǎo)致的慢性血管損傷中的作用還未見相關(guān)報道。本研究通過給予ApoE-/-小鼠高蛋氨酸飲食，建立HHcy模型，誘發(fā)動脈硬化早期斑塊。觀察吡格列酮對上述斑塊的影響，并對其作用機制進(jìn)行初步探討。
　　 方法：
　　 1.給予ApoE-/-小鼠高蛋氨酸飲食，高效液相色譜熒光法測定血漿同型半胱氨酸(homocysteine，Hcy)水平，相差顯微鏡下觀察小鼠主動脈根部病理學(xué)形態(tài)，免疫組織化學(xué)法檢

3、測主動脈SM-α-actin、細(xì)胞增殖核抗原(PCNA)的表達(dá)，硝基氮藍(lán)四唑法檢測血管局部活性氧。比較吡格列酮治療4周后，上述指標(biāo)的改變。
　　 2.體外培養(yǎng)Sprague-Dawley大鼠胸主動脈平滑肌細(xì)胞(smooth musclecells，SMCs)，利用5-溴脫氧嘧啶(5-BrdU)摻入實驗觀察SMCs增殖活性，Transwell方法觀察SMCs遷移活性。選擇NAD(P)H氧化酶抑制劑(DPI)、過氧化氫清除劑(NAC

4、)和p38絲裂原激活的蛋白激酶(mitogen-activated protein kinase，MAPK)特異性抑制劑(SB202190)，研究吡格列酮抑制Hcy介導(dǎo)的SMCs增殖和遷移涉及的分子機制。利用流式細(xì)胞儀檢測細(xì)胞中活性氧水平，化學(xué)發(fā)光法檢測NAD(P)H氧化酶活性，免疫印跡技術(shù)檢測p38 MAPK磷酸化，觀察吡格列酮預(yù)處理后Hcy介導(dǎo)的活性氧水平、NAD(P)H氧化酶活性和p38 MAPK磷酸化的變化。通過加入DPI、NA

5、C、SB202190觀察其對p38 MAPK磷酸化的影響。
　　 結(jié)果：
　　 1.ApoE-/-小鼠蛋氨酸喂養(yǎng)12周后，血漿Hcy水平升高，動脈硬化早期斑塊形成。經(jīng)吡格列酮治療4周的HHcy ApoE-/-小鼠血漿Hcy水平降低，動脈硬化早期病變的進(jìn)程延緩，斑塊中SMCs數(shù)量和增殖活性下降，且局部活性氧水平降低。
　　 2.體外培養(yǎng)條件下，吡格列酮預(yù)處理后Hcy介導(dǎo)的SMCs增殖和遷移活性下降，呈劑量依賴性和P

6、PAR-γ非依賴性。NAD(P)H氧化酶抑制劑(DPI)、過氧化氫清除劑(NAC)和p38 MAPK特異性抑制劑(SB202190)預(yù)處理后Hcy介導(dǎo)的SMCs增殖和遷移減少。吡格列酮預(yù)處理后Hcy介導(dǎo)的活性氧、NAD(P)H氧化酶活性及p38 MAPK磷酸化下降。并且，DPI和NAC抑制Hcy刺激作用下的活性氧產(chǎn)生和p38 MAPK磷酸化；SB202190抑制Hcy刺激作用下的p38 MAPK磷酸化。
　　 結(jié)論：吡格列酮治療