納米化殺手肽的制備表征和抗新生隱球菌感染的實驗研究.pdf

1、[研究背景]新生隱球菌所致的感染好發(fā)于細胞免疫功能低下患者,隨著器官移植、骨髓移植等新技術的發(fā)展以及AIDS患者的增多,隱球菌感染的發(fā)生率也呈逐年明顯上升的趨勢。研究發(fā)現(xiàn)隱球菌是一種胞內(nèi)兼性寄生菌,不僅可逃避巨噬細胞吞噬且即使被吞噬后也可存活于巨噬細胞內(nèi),可能是導致隱球菌病臨床復發(fā)的重要原因。因此選用合適載體將更多藥物輸送至感染細胞內(nèi)部是治愈該病的關鍵。殺手肽(killer peptide),是近期研發(fā)的一種人工合成十肽,其序列為AKV

2、TMTCSAS,它是一種水溶性多肽,對耐氟康唑白念珠菌、利什曼原蟲、巴西芽生菌和新生隱球菌均具有較強殺滅作用,初步研究表明其作用靶點主要為真菌細胞壁β1,3-葡聚糖。多肽類抗生素由于其結構完全不同于傳統(tǒng)抗真菌藥物,目前耐藥發(fā)生率較低,且同傳統(tǒng)治療深部真菌感染的藥物相比,靶點位于細胞壁因此對哺乳動物副作用小,因此殺手肽具有安全無毒和不易耐藥等優(yōu)點。 [研究目的]本研究旨在選擇合適納米材料作為殺手肽KP的有效載體,探索并優(yōu)化制備工藝

3、,制備出具有細胞內(nèi)靶向性且安全的載藥納米粒。 [研究方法]基于以上目的,經(jīng)過預實驗,我們選擇目前研究較多的載體材料聚乳酸-羥基乙酸(poly lactic-co-glycolic acid,PLGA),采用雙乳法制備殺手肽-聚乳酸羥基乙酸納米復合體(KP-PLGA-NP),并采用透射電鏡、掃描電鏡、動態(tài)光散射、測定包封率載藥量、考察體外釋放等手段進行相應的表征測定；采用平板計數(shù)法驗證人工合成殺手肽對新生隱球菌ATCC32609的

4、體外殺滅作用；構建小鼠隱球菌系統(tǒng)感染模型,通過生存期和重要臟器染菌量的變化比較納米制劑同未包裹KP的療效變化,并通過生化指標考察納米制劑毒副作用情況。 [研究結果]成功制備出并表征KP-PLGA-NP;驗證不同參數(shù)下其粒徑、包封率、分散度的變化趨勢,證明PVA濃度是影響表征的主要參數(shù)；證實人工合成KP具有較強抗新生隱球菌ATCC32609作用,其作用強度同濃度正相關,但療效不及CBS6995菌株,可能與ATCC32609菌株毒力

5、較強有關；同未被包裹的KP相比較,納米制劑使隱球菌系統(tǒng)感染小鼠生存期明顯延長,重要臟器染菌量顯著下降；納米物物對肝、腎及血液系統(tǒng)均未產(chǎn)生明顯損害。 [結論]納米材料包裹KP可顯著增強抗系統(tǒng)性隱球菌感染療效,其作用機制可能與納米材料的MPS細胞內(nèi)被動靶向性、對MPS系統(tǒng)的激活作用及減少肽類藥物同體內(nèi)各種酶的接觸有關,因此納米材料作為一種新型藥物傳遞與控釋的載體,具有靶向性、緩釋性、定時性和穩(wěn)定性等優(yōu)點。生物醫(yī)學和納米技術的結合將給