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文檔簡(jiǎn)介
1、植物內(nèi)生真菌(plant endophytic fungi)是指在其部分或全部生活史中存活于健康植物組織內(nèi)部、不引發(fā)宿主植物表現(xiàn)出明顯感染癥狀的一類真菌。自Strobel.等于1993年首次從短葉紫杉(Taxus brevifolia)樹皮中分離出一株內(nèi)生真菌(Taxomycesandreanae)能產(chǎn)生紫杉醇(taxol)后,利用微生物發(fā)酵被認(rèn)為是解決植化藥物短缺的潛在途徑?;⒄龋≒olygonurn cuspidatum)是秦巴山區(qū)
2、一種廣泛分布的中藥材,其活性成分白藜蘆醇(苷)具有抗癌、抑菌消炎、保肝利膽、抗氧化和降血脂等多方面的藥理活性。本研究以虎杖為材料,分離得到了一些內(nèi)生真菌,通過(guò)對(duì)菌株的分類鑒定和代謝產(chǎn)物的初步分析表明,部分內(nèi)生真菌能發(fā)酵產(chǎn)生白藜蘆醇苷(醇),具體研究結(jié)果如下。
1虎杖內(nèi)生真菌的分離、純化及初步分類鑒定
采用組織分離法,將新鮮虎杖根清洗干凈,并對(duì)其表面進(jìn)行消毒后,剪切成0.5mm×0.5mm的小塊,接入PDA平板
3、中,于28℃培養(yǎng)3~7d,分離、純化得到116株內(nèi)生真菌。形態(tài)分類結(jié)果初步表明,它們分別屬于從梗孢目、殼霉目、黑盤孢目、毛霉目和無(wú)孢目5目,及曲霉屬(Aspergillus)、青霉屬(Penicillium)、無(wú)孢類(Agonomycetaceae)、鐮孢霉屬(Fusarium)、毛霉屬(Mucor)、擬盤多毛孢屬(Pestalotia)、枝孢霉屬(Cladosporium)、鏈隔孢屬(Alternaria)及木霉屬(Trichoder
4、ma)9屬。
2產(chǎn)白藜蘆醇(苷)虎杖內(nèi)生真菌的篩選
將上述116菌株(還是部分代表菌株),分別接種于改良馬鈴薯液體培養(yǎng)基中,28℃,160r/min,培養(yǎng)7d后,按1:2(v/v或w/v)的比例,以乙酸乙酯分別對(duì)菌絲和發(fā)酵液萃取15min,合并萃取液,40℃真空旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)至干后,以甲醇溶解、定容至25mL,并以HPLC測(cè)定提取液中白藜蘆醇(苷)的含量。獲得兩株可產(chǎn)白藜蘆醇(苷)的內(nèi)生真菌,分別為M-56和L-1
5、8。其中,M-56只產(chǎn)白藜蘆醇苷,產(chǎn)量為1.029mg/L;L-18既產(chǎn)白藜蘆醇苷又產(chǎn)白藜蘆醇,含量分別為4.672和4.812mg/L。
3產(chǎn)白藜蘆醇(苷)虎杖內(nèi)生真菌的鑒定
根據(jù)菌落形態(tài)及顯微形態(tài)的觀察結(jié)果,將M-56和L-18菌株初步鑒定為鏈格孢屬(Alternaria)和青霉屬(Penicillium)真菌。在此基礎(chǔ)上,對(duì)兩菌株的ITS片段進(jìn)行擴(kuò)增,得到長(zhǎng)度均為564bp的DNA片段。經(jīng)測(cè)序并在NCB
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