虎杖中白藜蘆醇的分離純化研究.pdf

1、本研究通過詳細的資料調研，以具有抗癌、抗心血管疾病等重要生理活性并具廣闊市場前景的白藜蘆醇為研究對象，以湖南湘西豐富而價廉的虎杖資源為原料，對虎杖中自藜蘆醇的提取、分離純化工藝進行了深入而系統(tǒng)的研究，確定了工藝流程、分析方法和分離純化條件；本著開發(fā)高效的天然產物分離方法的原則，對分子印跡技術應用于白藜蘆醇的分離純化做了研究。具體內容摘要如下： 1.研究了虎杖中藥用活性成分的分析方法及穩(wěn)定性。建立了以甲醇-水為體系等度洗脫，同時測

2、定虎杖中白藜蘆醇和白藜蘆醇甙的HPLC分析方法及快速、準確測定大黃素的HPLC法；確定了定性分析虎杖中活性成分的TLC法，避免了使用氯仿等有毒試劑，方法簡便，為后續(xù)實驗研究提供了快速定性檢測手段；對白藜蘆醇的穩(wěn)定性進行了研究，得出了具有指導意義的結果。 2.對虎杖中藥用活性成分的提取工藝進行了研究。建立了同時提取虎杖中白藜蘆醇甙、白藜蘆醇及大黃素三種活性成分的常規(guī)溶劑提取工藝，有利于虎杖資源的開發(fā)利用；針對活性成分的結構特點，篩

3、選出一種植物精提復合酶，建立了酶法提取虎杖中白藜蘆醇的工藝，與常規(guī)溶劑提取法相比，酶法提取使白藜蘆醇得率由2.40mg/g提高到12.13mg/g，得率提高了5倍左右，且反應時間僅1.5h，較文獻報道的方法具有酶解效率高、反應時間短等特點；對酶解后的工藝進行優(yōu)化，同時考慮了白藜蘆醇和大黃素的提取，結果表明，優(yōu)化后的工藝具有省時、省能等特點，且產品在收率和質量上同時得到提高，從而進一步證明了酶法較常規(guī)溶劑提取法的優(yōu)越性，這一研究對其它中草

4、藥的酶法提取具有一定的參考價值；探討了酶解機制，建立了酶解動力學。 3.分離純化虎杖提取液中白藜蘆醇和大黃素的工藝研究。對酶解-乙醇提取液通過預處理分離得到大黃素溶液，并采用硅膠柱層析技術進一步純化，得到了純度達95％的大黃素產品，確定了工藝條件；全面而系統(tǒng)地研究了采用大孔吸附樹脂技術分離純化白藜蘆醇的工藝條件。將對白藜蘆醇吸附能力強的1＃樹脂和對白藜蘆醇吸附能力弱而對色素等雜質吸附能力強的2＃樹脂進行串聯(lián)，對經預處理得到的白藜

5、蘆醇溶液進行分步洗脫純化，使白藜蘆醇含量從40.2％提高到94.5％，經重結晶可得到純度大于99％的高純白藜蘆醇產品，具有處理量大、綠色、經濟等特點。采用大孔吸附樹脂分離純化白藜蘆醇的研究國內外未見文獻報道。 5.對1＃大孔樹脂吸附白藜蘆醇的熱力學和動力學性質進行了研究。通過對△G，△H，△S等熱力學參數(shù)的測試及大孔樹脂吸附傳質的擴散方程的數(shù)學模型的建立，對吸附行為做了合理解釋，探討了吸附機理，確定了吸附傳質的速控步驟，有利于充

6、分提高樹脂吸附容量及提高吸附傳質品質。 6.分子印跡分離技術在中草藥活性成分分離純化中的應用文獻報道不多。本研究采用分子印跡技術首次以白藜蘆醇為模板分子，制備了白藜蘆醇分子印跡聚合物，考察了分子印跡聚合物的吸附性能、選擇性能以及固相萃取性能，結果表明，分子印跡聚合物對模板分子具有高度的選擇性和專一的識別性，白藜蘆醇與結構類似物的分離因子分別為：αRes-Pol=3.73，αR。s-BPA=6.22；采用固相萃取法將該分子印跡聚合

7、物直接用于復雜體系(虎杖和花生根提取液)中白藜蘆醇的分離純化，樣品僅經一步處理，即可除去大部分雜質，達到良好的分離效果，展示了該技術的應用前景；通過紫外光譜、紅外光譜以及SEM電鏡掃描等手段，對分子印跡聚合物的形成及識別機理進行了探討。 本論文將酶解技術和大孔吸附樹脂串聯(lián)技術有機組合，對虎杖中白藜蘆醇進行了高效、綠色提制，同時兼顧另一含量豐富的活性成分大黃素的提取分離，一投多產，實現(xiàn)了原料的綜合利用。將分子印跡固相萃取技術應用于