牽張成骨與骨膜牽張成骨過程中肝細(xì)胞生長因子mRNA表達(dá)的實驗研究.pdf

1、目的： 在建立兔下頜骨牽張成骨與骨膜牽張成骨模型的基礎(chǔ)上，采用原位雜交的方法檢測肝細(xì)胞生長因子(HGF)的表達(dá)規(guī)律，探討HGF發(fā)揮的作用及作用機(jī)制，以期為該因子的外源性應(yīng)用及基因治療來加速骨形成提供理論依據(jù)。 方法： 選取成年新西蘭大白兔56只分別進(jìn)行牽張成骨與骨膜牽張成骨實驗，牽張成骨實驗中動物分為牽張組與骨折組，每組20只，牽張組行兩側(cè)下頜骨切開術(shù)，經(jīng)7天間歇期后以0.5mm/12h的速度牽張，7d后固定，分

2、別于間歇期末、牽張期末、固定期1w、3w、5w末處死4只動物；骨折組不牽張，分別于術(shù)后1w、2w、3w、5w、7w末處死4只動物。骨膜牽張成骨實驗中對兔一側(cè)下頜骨體外側(cè)骨膜牽張，術(shù)后第8d牽張兩次，每次1mm，從第9d開始每4d牽張1mm，連續(xù)20d，另一側(cè)作為空白對照側(cè)，分別于術(shù)后28d、35d、42d、56d隨機(jī)處死4只動物。取下頜骨標(biāo)本，通過HE染色和原位雜交對標(biāo)本進(jìn)行組織學(xué)分析并檢測肝細(xì)胞生長因子的表達(dá)規(guī)律。 結(jié)果：

3、 牽張成骨實驗牽張組間歇期末牽張間隙內(nèi)充滿成纖維細(xì)胞和膠原纖維，可見炎癥細(xì)胞散在于纖維之間，牽張期末可見少量新生的骨小梁及類骨質(zhì)沿牽引力方向形成，固定5w時可見大量骨組織形成，纖維組織減少。HGF mRNA在間歇期末有少量表達(dá)，主要位于牽張間隙內(nèi)炎性細(xì)胞的細(xì)胞漿，牽張期末可見陽性染色主要位于牽張間隙內(nèi)血管內(nèi)皮細(xì)胞及血管壁間充質(zhì)細(xì)胞，骨斷端新骨形成區(qū)開始出現(xiàn)陽性染色，固定1w周時，陽性表達(dá)強(qiáng)度達(dá)到峰值，隨著時間的延長，陽性表達(dá)強(qiáng)度減弱

4、，固定5w時，基本檢測不到目的基因的陽性表達(dá)，牽張組與骨折組之間無明顯差別。骨膜牽張成骨實驗沖，術(shù)后28d牽張側(cè)骨膜與骨皮質(zhì)接觸部位開始出現(xiàn)細(xì)胞活躍增生，骨膜與骨接觸部位細(xì)胞體積增大，出現(xiàn)骨基質(zhì)沉積，部分骨細(xì)胞被基質(zhì)包繞；術(shù)后42d可見骨小梁結(jié)構(gòu)出現(xiàn)，平行于牽張方向，術(shù)后56d新生骨質(zhì)更加成熟，骨小梁增粗增多。HGF mRNA在正常骨膜組織中呈弱陽性表達(dá)，僅位于少數(shù)間充質(zhì)細(xì)胞，在受到外力牽張的條件下，表達(dá)增強(qiáng)，術(shù)后35d時于新生骨基質(zhì)處