我國(guó)伯氏疏螺旋體致病性及感染機(jī)制研究.pdf

1、本研究以我國(guó)東北地區(qū)的兩種致病基因型Borrelia garinii和Borrelia afzelii型伯氏疏螺旋體菌株為研究對(duì)象，分別采用實(shí)驗(yàn)動(dòng)物學(xué)的方法系統(tǒng)地對(duì)其致病性進(jìn)行了分析，采用分子流行病學(xué)的方法在型內(nèi)進(jìn)行了不同致病菌群的劃分，在確立了我國(guó)的強(qiáng)侵襲力菌群之后，采用比較蛋白質(zhì)組學(xué)的研究方法對(duì)其跨種傳播的分子機(jī)制進(jìn)行了研究。 主要結(jié)果如下： (1)B．garinii基因型菌株JW1主要導(dǎo)致C3H小鼠關(guān)節(jié)、腎臟嚴(yán)重的

2、病理改變，并且對(duì)腦組織有輕微損傷，其克隆后的菌株傳代20代后毒力減弱，其毒力減弱的機(jī)制值得進(jìn)一步研究；B．a(chǎn)fzelii基因型菌株VH7和B．burgdorferi sensu stricto基因型菌株：B31主要導(dǎo)致關(guān)節(jié)炎癥狀，除VH7之外其它菌株均可再次從動(dòng)物體內(nèi)分離得到，提示我國(guó)B．garinii基因型菌株JW1是強(qiáng)侵襲力菌株，而B(niǎo)．a(chǎn)fzelii基因型菌株VH7則侵襲力較弱。 (2)根據(jù)伯氏疏螺旋體主要致病因子外膜蛋白C

3、(OspC)基因多態(tài)性分析，供試的我國(guó)18株伯氏疏螺旋體分別屬于12個(gè)ospC致病群，其中B．garinii基因型內(nèi)8個(gè)，均獨(dú)立于已報(bào)道的致病類(lèi)群之外；B．a(chǎn)fzelii基因型內(nèi)4個(gè)，有1個(gè)屬GenBank已報(bào)道的A1致病群，其它未見(jiàn)報(bào)道；動(dòng)物實(shí)驗(yàn)證明JWl所在菌群具有較強(qiáng)侵襲力，NMK3菌群次之，B．a(chǎn)fzelii型的VH7菌群侵襲力較弱；序列分析顯示在B.garmii和B．a(chǎn)fzelii基因型菌株之間存在質(zhì)?；虻乃睫D(zhuǎn)移和重組等罕

4、見(jiàn)的現(xiàn)象，提示我國(guó)的萊姆病的診斷以及疫苗抗原的選擇應(yīng)考慮多價(jià)聯(lián)合抗原。 (3)首次分析了B．garinii型伯氏疏螺旋體在模擬的媒介和宿主生長(zhǎng)條件下的全菌可溶性蛋白表達(dá)譜的差異，在pH4-7和pH6-11的18cm膠上挑選出75個(gè)高豐度的、重復(fù)性好的差異表達(dá)的蛋白，質(zhì)譜鑒定出25個(gè)，經(jīng)分析有5個(gè)蛋白上調(diào)表達(dá)，與伯氏疏螺旋體傳播和感染機(jī)制密切相關(guān)，它們分別是糖質(zhì)新生和能量合成代謝以及三酰甘油合成代謝中的三個(gè)關(guān)鍵酶、調(diào)節(jié)細(xì)胞運(yùn)動(dòng)功能

5、的趨化因子CheY，以及伯氏疏螺旋體黏附分子跨膜蛋白P66。CheY是伯氏疏螺旋體首次從蛋白質(zhì)水平上鑒定出來(lái)的趨化調(diào)節(jié)因子。本研究推測(cè)病原體在從媒介到宿主的傳播過(guò)程中：上調(diào)表達(dá)代謝過(guò)程中的三個(gè)關(guān)鍵酶來(lái)加速繁殖以適應(yīng)入侵宿主的需要，提高鞭毛馬達(dá)蛋白和轉(zhuǎn)向蛋白合成來(lái)增加其運(yùn)動(dòng)性和穿透性；上調(diào)P66的合成量增加與宿主動(dòng)物相應(yīng)受體的結(jié)合力來(lái)增加其定植能力，從而在宿主體內(nèi)建立持久的感染。 (4)本研究構(gòu)建了可用于萊姆病活體成像動(dòng)物模型的穿