原發(fā)性免疫缺陷病的臨床特征和分子特點(diǎn)分析.pdf

1、第一部分 24例Wiskott-Aldrich綜合征臨床特征與分子特點(diǎn)分析
　　 目的：探討來自中國23個(gè)不同家系的24例Wiskott-Aldrich綜合征患兒的臨床特征及分子特點(diǎn)。
　　 方法：2007年4月～2009年7月收集在重慶醫(yī)科大學(xué)附屬兒童醫(yī)院治療的24例疑診Wiskott-Aldrich綜合征患兒外周靜脈血，采用流式細(xì)胞術(shù)（FCM）檢測患兒外周血單個(gè)核細(xì)胞（PBMC）中WASP表達(dá)。掃描電鏡觀察患兒外周血

2、淋巴細(xì)胞形態(tài)。PCR擴(kuò)增WASP基因序列并直接雙向測序分析24例患兒及親屬基因突變情況。總結(jié)確診WAS患兒的臨床資料。
　　 結(jié)果：24例患兒均為男性，具有典型WAS的臨床特征。其中2例發(fā)生自身免疫性溶血性貧血（AIHA），1例患視網(wǎng)膜母細(xì)胞瘤（RB）。5例淋巴細(xì)胞掃描電鏡（SEM）檢查可見典型微絨毛異常。21例患兒采用FCM檢測外周血PBMC的WASP表達(dá)，18例患兒WASP不表達(dá)，3例WASP部分表達(dá)。WASP基因分析在23

3、例患兒中發(fā)現(xiàn)20種不同突變，包括錯(cuò)義突變5例，無義突變4例，缺失突變4例，插入突變3例，拼接位點(diǎn)突變6例，復(fù)合突變1例。其中新型突變7例。突變分布于WASP基因7個(gè)外顯子和4個(gè)內(nèi)含子。1例WAS患兒在WASP基因編碼區(qū)未發(fā)現(xiàn)基因突變。3例WASP部分表達(dá)患兒WASP基因分析發(fā)現(xiàn)1例WASP基因第二位點(diǎn)突變。22例明確基因診斷的患兒的母親及相關(guān)親屬進(jìn)行WASP基因檢測，在20個(gè)家系中發(fā)現(xiàn)23例WASP基因突變攜帶者。5例WAS患兒接受造血

4、干細(xì)胞移植，移植后5例均正常表達(dá)WASP，但1例死于爆發(fā)性巨細(xì)胞病毒感染。
　　 結(jié)論：通過對24例WAS患兒基因分析，發(fā)現(xiàn)7個(gè)新型WASP基因突變位點(diǎn)。在中國人群中報(bào)道1例WASP基因第二位點(diǎn)突變。FCM檢測和WASP基因分析能確診并檢出攜帶者，有利于WAS患兒的及時(shí)治療和相關(guān)的遺傳咨詢。
　　 第二部分 21例先天性無丙種球蛋白血癥的臨床特征和分子特點(diǎn)
　　 目的：分析和探討21例先天性無丙種球蛋白血癥患兒的

5、臨床特征及分子特點(diǎn)。
　　 方法：2008年3月～2010年2月收集在重慶醫(yī)科大學(xué)附屬兒童醫(yī)院就診的21例先天性無丙種球蛋白血癥患兒及親屬外周靜脈血，采用RT-PCR擴(kuò)增BTK基因序列并直接雙向測序分析患兒及親屬基因突變情況。對未發(fā)現(xiàn)BTK基因突變的患兒進(jìn)一步采用PCR擴(kuò)增常染色體隱性遺傳無丙種球蛋白血癥的相關(guān)基因，包括μHc，λ5，Igα和Igβ。收集21例先天性無丙種球蛋白血癥患兒的臨床資料。
　　 結(jié)果：21例先天

6、性無丙種球蛋白血癥患兒起病年齡0.9±0.5歲，診斷年齡6.3±3.0歲。呼吸道感染是最常見的臨床表現(xiàn)（n=20，95.2％），其它依次為關(guān)節(jié)炎（n=8，38.1％），中耳炎（n=8，38.1％），腹瀉（n=6，28.6％），皮膚感染（n=6，28.6％）和腦膜腦炎（11=1，4.8％）。1例患兒發(fā)生前B細(xì)胞白血病，2例患兒因反復(fù)肺炎進(jìn)展為慢性肺疾病。BTK基因分析在18例患兒中發(fā)現(xiàn)16種不同突變，其中包括7種新型突變（del373-4

7、41，504 del G，537 del C，851 del A，1637 G>A，1879 T>C，del1482-1882）。突變類型包括缺失突變6例，錯(cuò)義突變4例，無義突變3例，拼接位點(diǎn)突變5例。3例患兒未見BTK基因突變。18例BTK基因突變中10例位于酪氨酸激酶區(qū)，4例位于血小板.白細(xì)胞C激酶底物同源區(qū)，3例位于Src同源區(qū)3，1例跨越酪氨酸激酶同源區(qū)、Src同源區(qū)3、Src同源區(qū)2和酪氨酸激酶區(qū)。對BTK基因未見突變的3例患

8、兒進(jìn)行常染色體隱性遺傳無丙種球蛋白血癥的相關(guān)基因篩選，發(fā)現(xiàn)1個(gè)μHC基因的復(fù)合突變（1956 G>A，170-175 insert C）。
　　 結(jié)論：通過對21例中國先天性無丙種球蛋白血癥患兒分子特點(diǎn)分析，發(fā)現(xiàn)7個(gè)BTK基因的新型突變。在中國人群中首次報(bào)道μHC基因突變的臨床特征?；蚍治鲇兄谙忍煨詿o丙種球蛋白血癥患兒的明確診斷，有利于發(fā)現(xiàn)攜帶者和進(jìn)行遺傳咨詢。
　　 第三部分 IL-7Rα基因缺陷導(dǎo)致嚴(yán)重聯(lián)合免疫缺

9、陷病和Omenn綜合征的臨床特征和分子特點(diǎn)
　　 目的：探討IL-7Rα基因缺陷導(dǎo)致嚴(yán)重聯(lián)合免疫缺陷病和RAG1基因突變導(dǎo)致Omenn綜合征的臨床特征和分子特點(diǎn)。
　　 方法：2008年2月～11月在重慶醫(yī)科大學(xué)附屬兒童醫(yī)院收治3例男性患兒，均在生后早期出現(xiàn)反復(fù)、嚴(yán)重的感染，抗生素治療效果較差。其中2例患兒全身反復(fù)出現(xiàn)大片紅色斑丘疹、脫屑及肝脾腫大。采用PCR方法擴(kuò)增患兒及父母IL-7Rα基因和RAG1/RAG2基因，P

10、CR產(chǎn)物直接進(jìn)行雙向序列測定。采用25個(gè)TCRVβ亞家族的特異性正向引物和1個(gè)共同的Cp反向引物擴(kuò)增TCRVβ進(jìn)行克隆譜型分析。采用STR分析除外母源性T細(xì)胞植入。
　　 結(jié)果：患兒1的免疫球蛋白IgG686.7mg/dL，IgA24.9 mg/dL，IgM20.6 mg/dL，IgE2.3IU/ml。淋巴細(xì)胞分類T淋巴細(xì)胞（CD3+）0，B淋巴細(xì)胞（CD19+）58％，NK細(xì)胞（CD16+CD56+）42％?；蚍治龌純簽镮L

11、-7Rα基因的復(fù)合雜合突變（638 C>T；IVS4（+1）G>A），父母均為攜帶者。第4內(nèi)含子剪接位點(diǎn)突變（IVS4（+1）G>A）為首次報(bào)道的突變類型。RT-PCR檢測發(fā)現(xiàn)患兒IL-7Ra mRNA表達(dá)明顯降低?；純篒L-7RαcDNA經(jīng)巢式PCR擴(kuò)增并進(jìn)行T-A克隆，測序發(fā)現(xiàn)外顯子4出現(xiàn)64個(gè)核苷酸缺失（496-559 del，K158fsX160）?；純?的免疫球蛋白IgG1150mg/dL，IgA80mg/dL，IgM180m

12、g/dL，IgE5.4IU/ml。淋巴細(xì)胞分類T淋巴細(xì)胞（CD3+）69％，B淋巴細(xì)胞（CD19+）3％，NK細(xì)胞（CD16+CD56+）27％。患兒3免疫球蛋白IgG4847mg/dL（IVIG后），IgA46mg/dL，IgM129mg/dL，IgE1.2IU/ml。淋巴細(xì)胞分類T淋巴細(xì)胞（CD3+）21％，B淋巴細(xì)胞（CD19+）1％，NK細(xì)胞（CD16+CD56+）69％。PHA刺激后患兒2和3淋巴細(xì)胞增殖均極度低下。STR分析

13、除外患兒2和3母源性T細(xì)胞植入可能。RAG1基因組DNA測序發(fā)現(xiàn)患兒2為RAG1基因的復(fù)合突變（G1983A，R624H；C2444T，R778W）。患兒3為RAG1基因的純合缺失突變（del2302，1729X）。TCRVβ克隆譜型分析顯示患兒2的25個(gè)TCRVβ亞家族均為單克隆或寡克隆，患兒3的14個(gè)TCRVβ亞家族為單克隆或寡克隆，11個(gè)TCRVβ亞家族極弱或缺失。
　　 結(jié)論：在中國人群中首次報(bào)道了2例明確基因診斷的Om