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文檔簡介
1、半滑舌鰨(Cynoglossus semilaevis Günther)是我國近海底層的大型名貴經(jīng)濟(jì)魚類。本實驗采用分子生物學(xué)、組織學(xué)、免疫組織化學(xué)和激素放射免疫測定方法,綜合分析了促性腺激素受體(FSHR和LHR)在半滑舌鰨繁殖周期中的功能作用,所得結(jié)果與結(jié)論如下:
1.半滑舌鰨促濾泡激素受體(FSHR)基因的克隆和表達(dá)
本實驗克隆了半滑舌鰨促濾泡激素受體(FSHR)基因cDNA的全長序列序列(3105bp
2、),編碼704個氨基酸,含有典型的跨膜螺旋結(jié)構(gòu)區(qū)域(TM helix),屬于糖蛋白激素受體(GHR)家族。組織表達(dá)分析表明,F(xiàn)SHR基因表達(dá)廣泛,除在性腺中大量表達(dá)外,其他非性腺組織也有表達(dá),尤其以脾、腎、頭腎表達(dá)最為強(qiáng)烈。
通過RT-PCR方法首次對FSHR mRNA在雌性半滑舌鰨的卵巢和腦2種組織;雄性半滑舌鰨的精巢、腦和脾3種組織中的表達(dá)進(jìn)行了周年變化分析。結(jié)果顯示,F(xiàn)SHR mRNA在上述5種組織中的表達(dá)均呈周期性
3、變化。通過與血漿中E2含量、T含量和性腺發(fā)育GSI指數(shù)綜合分析,探討了FSHR在半滑舌鰨繁殖周期中的生理作用。
2.半滑舌鰨促黃體激素受體(LHR)基因的表達(dá)分析
采用巢式RT-PCR法克隆了半滑舌鰨促黃體激素受體(LHR)基因部分序列,該基因片段長度為614bp,編碼204個氨基酸,含有典型的跨膜螺旋結(jié)構(gòu)區(qū)域(TMhelix),屬于糖蛋白激素受體(GHR)家族。組織表達(dá)分析表明,LHR基因在半滑舌鰨的卵巢、
4、精巢、肝臟、胃、腸、鰓、心、脾、腎、頭腎和腦中均有表達(dá),表達(dá)量有所不同,以脾和腎中表達(dá)量最豐富。
通過RT-PCR方法首次對LHR mRNA在雌性半滑舌鰨的卵巢、腦、脾和腎4種組織;雄性半滑舌鰨的精巢和脾2種組織中的表達(dá)進(jìn)行了周年變化分析。結(jié)果顯示,F(xiàn)SHR mRNA在上述6種組織中的表達(dá)均呈周期性變化。通過結(jié)合性腺發(fā)育GSI指數(shù)和FSHR的基因表達(dá)特點,分析了LHR在半滑舌鰨繁殖周期中的生理作用。
3.半滑
5、舌鰨性腺促性腺激素受體的免疫組織化學(xué)研究
3.1促濾泡激素受體(FSHR)在半滑舌鰨性腺中的免疫組織化學(xué)定位
FSHR在Ⅱ時相卵母細(xì)胞的濾泡膜中有較弱的的分布;隨著卵母細(xì)胞的發(fā)育,陽性反應(yīng)越來越強(qiáng)烈,在Ⅳ時相和Ⅴ時相卵母細(xì)胞的胞質(zhì)和濾泡層中都有FSHR陽性反應(yīng),而且Ⅴ時相卵母細(xì)胞的顆粒細(xì)胞層陽性反應(yīng)比膜細(xì)胞層強(qiáng)。到了Ⅵ時相卵母細(xì)胞時,濾泡層中反應(yīng)微弱,胞質(zhì)陽性反應(yīng)強(qiáng)烈。
在精巢的各個發(fā)育階段中,
6、FSHR在精原細(xì)胞、精母細(xì)胞、精子細(xì)胞及精小葉間質(zhì)處均呈免疫陽性反應(yīng),在Ⅴ期精巢時間質(zhì)細(xì)胞反應(yīng)最強(qiáng)烈;而在發(fā)育各期中的精原細(xì)胞核仁、精母細(xì)胞核及精子均呈免疫陰性反應(yīng)。
FSHR在半滑舌鰨卵巢和精巢中免疫組化陽性反應(yīng)的強(qiáng)弱變化與FSHR基因在卵巢和精巢中表達(dá)變化模式一致,通過以上結(jié)果表明,半滑舌鰨FSRH主要在卵母細(xì)胞最后成熟和排精時起主要作用。
3.2促黃體激素受體(LHR)在半滑舌鰨性腺中的免疫組織化學(xué)定位
7、
LHR在Ⅱ時相卵母細(xì)胞濾泡膜有較弱表達(dá),在Ⅲ時相卵母細(xì)胞的濾泡層和胞質(zhì)中陽性反應(yīng)強(qiáng)烈,隨著卵母細(xì)胞的發(fā)育FSHR陽性反應(yīng)逐漸減弱,在Ⅴ時相卵母細(xì)胞時只有濾泡層的膜細(xì)胞層檢測到FSHR陽性反應(yīng),Ⅵ期卵巢中卵母細(xì)胞的濾泡層有較弱陽性反應(yīng)。
在各個發(fā)育階段精巢的精原細(xì)胞、精母細(xì)胞、精子細(xì)胞和細(xì)胞間質(zhì)有不同程度的IMR免疫陽性反應(yīng),在Ⅴ期精巢的間質(zhì)處陽性反應(yīng)最強(qiáng)烈。
LHR在半滑舌鰨卵巢和精巢中免疫組
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