大鼠腦出血后MMP-2、MMP-9、VEGF表達(dá)對(duì)微血管的影響及強(qiáng)力霉素的作用.pdf

1、背景及目的：
　　 腦出血具有高死亡率和致殘率的特點(diǎn),給家庭和社會(huì)造成沉重負(fù)擔(dān),目前仍然缺乏有效治療手段。研究發(fā)現(xiàn),腦出血后存在“缺血半暗帶”,腦組織缺血缺氧及腦血管完整性的破壞,且有可能血管生成。在血管生成的過(guò)程中,血管細(xì)胞外基質(zhì)層(extracellular matrix,ECM)的降解,內(nèi)皮細(xì)胞與ECM分離導(dǎo)致內(nèi)皮細(xì)胞增值、移行。
　　 研究表明,基質(zhì)金屬蛋白酶-2(matrix metallopmteinases

2、-2,MMP-2)、MMP-9可降解ECM的Ⅳ型膠原蛋白；血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子(vascular endothelialgrowth factor,VEGF)具有促進(jìn)血管生成及促血管通透性作用。在腫瘤的研究中認(rèn)為MMP-2、MMP-9及VEGF可能與血管生成有關(guān),由于新生血管可改善微循環(huán)促進(jìn)血腫吸收及神經(jīng)功能恢復(fù),另一方面其結(jié)構(gòu)功能不全,可能加重腦出血早期腦水腫。因此,研究各時(shí)間段血管生成情況及機(jī)制對(duì)腦出血的治療有重要意義。
　　

3、本研究用廣譜基質(zhì)金屬蛋白酶抑制劑強(qiáng)力霉素對(duì)腦出血大鼠模型進(jìn)行干預(yù),觀察MMP-2、MMP-9及VEGF的表達(dá)變化及腦出血后微血管生成情況,為腦出血后的病理機(jī)制及治療提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。
　　 材料與方法:
　　 1.實(shí)驗(yàn)動(dòng)物分組及給藥方法
　　 健康成年雌性SD大鼠,共66只,體重340±30g。隨機(jī)分為對(duì)照組、模型組、干預(yù)1組和干預(yù)2組；并按處死時(shí)間分3個(gè)亞組:3d、7d和12d(干預(yù)2組為7d和12d),每個(gè)亞組6

4、只大鼠。造模成功后,對(duì)照組、模型組每只大鼠用生理鹽水1次/d灌胃。干預(yù)1組用強(qiáng)力霉素懸濁液按30mg/kg.d灌胃,5d后改用生理鹽水；干預(yù)2組第5d改用強(qiáng)力霉素懸濁液,方法同模型組。直至處死前24h。
　　 2.模型制作
　　 大鼠經(jīng)10％水合氯醛(350mg/kg)腹腔注射麻醉后,用微量進(jìn)樣器將80μl自體未凝尾動(dòng)脈血緩慢注入大鼠左側(cè)尾狀核。對(duì)照組注入等量生理鹽水。動(dòng)物麻醉清醒后,參照Z(yǔ)ea-longa等評(píng)分標(biāo)準(zhǔn),1

5、～3分為模型成功。
　　 3.腦組織切片的制備及指標(biāo)檢測(cè)
　　 大鼠斷頭取腦后,常規(guī)固定、脫水、石蠟包埋、制成3μm切片,用兔抗鼠MMP-2、MMP-9、VEGF及CD34抗體采用SP法進(jìn)行免疫組化染色,陽(yáng)性者為棕黃色。每張片選取5個(gè)不同區(qū)域進(jìn)行高倍鏡(×200)觀察,應(yīng)用圖象分析系統(tǒng)測(cè)其陽(yáng)性區(qū)平均灰度值,取均值。CD34陽(yáng)性血管計(jì)數(shù)是先用低倍鏡尋找陽(yáng)性血管較密集區(qū),選取5個(gè)高倍鏡視野直接統(tǒng)計(jì)陽(yáng)性血管數(shù),取均值。

6、　　 4.統(tǒng)計(jì)學(xué)方法
　　 所有數(shù)據(jù)均以(x)±s表示,使用SPSS13.0統(tǒng)計(jì)軟件包進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析,采用t檢驗(yàn)和t’檢驗(yàn)。取α=0.05作為檢驗(yàn)水準(zhǔn)。
　　 結(jié)果：
　　 1.MMP-2、MMP-9及VEGF的表達(dá)
　　 3種因子在各組的陽(yáng)性區(qū)平均灰度值均隨著時(shí)間的推移逐漸減少,除了MMP-2在模型組的7d和3d時(shí)表達(dá)差別無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)外,其他各組的差別均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。同

7、時(shí)間點(diǎn),對(duì)照組、干預(yù)1組和干預(yù)2組較模型組減少,差別有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。
　　 2.CD34陽(yáng)性血管計(jì)數(shù)
　　 對(duì)照組和模型組的陽(yáng)性血管計(jì)數(shù)在3d時(shí)最多,隨著時(shí)間推移逐漸減少,且與模型組相比,對(duì)照組減少的速度快,兩組的差別有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)；干預(yù)1組3d時(shí)較模型組少,但7d時(shí)較多,減少速度慢,且各時(shí)間點(diǎn)與模型組差別有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)；干預(yù)2組較同時(shí)間點(diǎn)模型組明顯減少,差別有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0