多西環(huán)素對哮喘大鼠VEGF、MMP-9的作用及血管重塑的影響.pdf

1、目的:研究多西環(huán)素對哮喘大鼠VEGF、MMP-9表達(dá)的影響。成功建立哮喘大鼠模型，檢測肺組織及血清中VEGF和MMP-9水平，并結(jié)合氣道壁厚度及血管密度反映血管重塑、氣道重塑;通過對比多西環(huán)素干預(yù)后VEGF、MMP-9水平及氣道壁厚度、血管密度的變化，探討多西環(huán)素對哮喘氣道重塑、血管重塑的作用。
　　 方法:將33只清潔級SD大鼠（雄性，6周齡，體重50-100g之間）隨機(jī)分成正常對照組、哮喘模型組和多西環(huán)素干預(yù)組，每組11只。

2、其中哮喘模型組方法制備，分別于實(shí)驗第1、8天對大鼠腹腔注射OVA100mg和氫氧化鋁100mg（混于生理鹽水2mL中）進(jìn)行致敏，第15天起將大鼠置于自制的非完全密閉霧化吸入箱內(nèi)，給予OVA溶液霧化吸入，隔日1次，每次30min，共激發(fā)20次，根據(jù)大鼠表現(xiàn)調(diào)整其濃度。當(dāng)大鼠出現(xiàn)煩躁、嗆咳、呼吸急促、活動量下降等典型的哮喘發(fā)作的表現(xiàn)時為激發(fā)成功。而多西環(huán)素組則在每次OVA霧化吸入前30min按30mg/kg經(jīng)口腔灌服方式給予小鼠多西環(huán)素，正

3、常對照組以生理鹽水代替OVA;以上兩組致敏和激發(fā)方法與哮喘組相同。在最后一次激發(fā)24小時后，將大鼠以1％戊巴比妥鈉麻醉，取材。收集支氣管肺泡灌洗液，計數(shù)細(xì)胞總數(shù)、中性粒細(xì)胞、淋巴細(xì)胞及嗜酸性粒細(xì)胞;部分肺組織行病理切片，HE染色;免疫組織化學(xué)法檢測各組大鼠肺組織中VEGF和MMP-9的表達(dá)變化，并應(yīng)用圖像分析軟件技術(shù)測量VEGF和MMP-9的相對表達(dá)強(qiáng)度;ELISA法檢測血清中的VEGF的含量;應(yīng)用計算機(jī)圖像分析技術(shù)測定氣道壁厚度及血管

4、密度。
　　 結(jié)果:
　　 1、支氣管肺泡灌洗液(BALF)中細(xì)胞計數(shù)及細(xì)胞分類的變化:細(xì)胞總數(shù)及嗜酸性粒細(xì)胞結(jié)果(×106/L):正常對照組分別為9.42±3.67、1.24±0.72，哮喘組分別為35.53±7.06、4.84±0.65，多西環(huán)素組分別為14.66±5.81、2.14±0.58。三組中哮喘組的細(xì)胞總數(shù)和嗜酸性粒細(xì)胞均高于其他兩組，有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.01);而多西環(huán)素組亦高于對照組，有統(tǒng)計學(xué)意義(F

5、=64.840，P＜0.05;F=90.598，P＜0.01)。
　　 2、病理結(jié)果:哮喘組大鼠肺組織病理切片可見支氣管黏膜增厚、氣道平滑肌明顯增厚、血管增生、血管壁增厚，且支氣管黏膜下及肺泡間質(zhì)等處可見大量炎性細(xì)胞浸潤。多西環(huán)素組的支氣管壁增厚程度、血管增生及炎性細(xì)胞浸潤等均較哮喘組減輕。正常對照組的大鼠肺組織病理切片可見支氣管管腔規(guī)則，支氣管黏膜上皮、黏膜肌層、肺組織結(jié)構(gòu)完整，偶可見炎性細(xì)胞。
　　 3、圖像分析結(jié)果

6、:哮喘組大鼠的氣道壁厚度（μm2/μm）與血管密度（個/mm2）（109.95±13.85;155.55±14.31）均高于多西環(huán)素組（86.37±5.85;116.64±7.33），有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.01);兩組又均高于對照組(65.47±7.22;95.45±7.19)，有統(tǒng)計學(xué)意義(F=58.737，P＜0.01;F=98.885，P＜0.01)。
　　 4、免疫組化法結(jié)果:哮喘組大鼠肺組織中MMP-9及VEGF的平均

7、光密度值（0.52±0.06、0.45±0.04）高于多西環(huán)素組（0.39±0.06、0.27±0.06），有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.05);兩組均高于對照組（0.24±0.06、0.21±0.04），有統(tǒng)計學(xué)意義(F=57.966，P＜0.01;F=75.261，P＜0.01)。
　　 5、ELISA法測定血清中VEGF的含量(pg/ml):哮喘組大鼠血清中的VEGF含量（202.86±16.90）高于多西環(huán)素組（169.94±1

8、6.65），有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.01)，兩組均高于對照組（137.75±17.02），有統(tǒng)計學(xué)意義(F=41.043，P＜0.01)。
　　 6、相關(guān)性分析結(jié)果:血管密度與氣道壁厚度呈顯著正相關(guān)(r=0.891，P＜0.01)，與肺組織中MMP-9、VEGF的表達(dá)水平呈顯著正相關(guān)(r=0.793，P＜0.01;r=0.889，P＜0.01)，與血清中VEGF水平呈顯著正相關(guān)(r=0.855，P＜0.01);肺組織中MMP-9與

9、VEGF的表達(dá)水平呈顯著正相關(guān)(r=0.796，P＜0.01)。
　　 結(jié)論:
　　 1、哮喘組大鼠氣道中存在明顯的炎性細(xì)胞浸潤，提示哮喘是由多種炎性細(xì)胞參與的氣道炎癥，而多西環(huán)素可明顯減輕氣道炎癥。
　　 2、多西環(huán)素可明顯減輕哮喘大鼠肺組織中的腺體增生、氣道壁增厚、血管增生等病理改變，亦可明顯降低氣道壁厚度及血管密度，且氣道壁厚度與血管密度呈顯著正相關(guān)，說明新生血管形成在氣道重塑過程中起著重要作用，是其中的重

10、要方面，而多西環(huán)素可明顯減輕氣道重塑、血管重塑。
　　 3、哮喘大鼠MMP-9及VEGF的表達(dá)水平明顯升高，而多西環(huán)素可使二者表達(dá)水平明顯降低，且MMP-9與VEGF表達(dá)水平呈正相關(guān)，證實(shí)在哮喘的發(fā)病過程中，VEGF、MM-9發(fā)揮著重要作用，且二者之間存在協(xié)同調(diào)節(jié)關(guān)系;而多西環(huán)素可抑制MMP-9的活性和表達(dá)，并可導(dǎo)致VEGF表達(dá)的下調(diào)。
　　 4、相關(guān)分析結(jié)果顯示大鼠MMP-9、VEGF表達(dá)水平與血管密度呈正相關(guān)，證實(shí)M