MMP-2、MMP-9在創(chuàng)傷后創(chuàng)面受“再次刺激”后局部表達(dá)的變化.pdf

1、目的：臨床工作中發(fā)現(xiàn)，對(duì)傷后6小時(shí)以上的傷口、亞急性或者慢性傷口實(shí)施手術(shù)，特別是施加一個(gè)張力縫合，容易導(dǎo)致線結(jié)周圍的紅腫，甚至組織溶解。既往將之歸結(jié)于傷口感染,造成病程延長(zhǎng)，醫(yī)療費(fèi)用增加，甚至出現(xiàn)糾紛。如果是單純的感染原因，應(yīng)該容易通過(guò)徹底清洗消毒、給予抗生素預(yù)防及治療，但情況往往并非如此，因此值得進(jìn)一步研究。創(chuàng)傷后傷口局部會(huì)聚集大量炎癥細(xì)胞，分泌大量炎性介質(zhì)，參與、調(diào)控傷口的愈合[1]。一旦傷口及時(shí)愈合，這些聚集的炎癥細(xì)胞也將逐漸消散

2、，歸于正常。否則，如果創(chuàng)面遷延，這種細(xì)胞聚集的情況也會(huì)持續(xù)，繼續(xù)參與創(chuàng)面愈合過(guò)程。在此基礎(chǔ)上，如果再施加一個(gè)刺激，如再次損傷、張力、異物、微生物等，已經(jīng)積聚于創(chuàng)面局部的炎癥細(xì)胞可以對(duì)續(xù)加的上述刺激產(chǎn)生較初次受傷時(shí)快而強(qiáng)的反應(yīng)，我們稱之為傷口“高炎癥反應(yīng)”現(xiàn)象。這種“反應(yīng)”的結(jié)果往往造成局部紅腫、組織溶解。有研究表明，如果組織中 MMP-2/MMP-9過(guò)量表達(dá)，會(huì)降解細(xì)胞外基質(zhì)(extracellular matrix，ECM)、基底膜，

3、造成組織溶解。本研究基于這一現(xiàn)象的特殊性，對(duì)MMP-2、MMP-9在創(chuàng)傷后局部“高炎癥反應(yīng)”中的變化進(jìn)行實(shí)驗(yàn)研究。
　　方法：96只SD大鼠隨機(jī)分成縫線組（24只）、張力組（24只）、對(duì)照組（48只），全部制作背部皮膚全層缺損創(chuàng)傷模型。具體分組：縫線組分別采用不同刺激強(qiáng)度的縫線（4-0無(wú)損傷縫線，0號(hào)絲線），于傷后第三天縫合創(chuàng)面；張力組分別設(shè)計(jì)大小不同的創(chuàng)面（0.5cm*4cm，1.5cm*4cm），于傷后第三天采用相同縫線縫合創(chuàng)

4、面；對(duì)照組為傷后立即給予縫合，縫線張力因素分別對(duì)照縫線組及張力組，刺激因素相同。傷后大鼠放入單籠飼養(yǎng)，背部創(chuàng)面無(wú)菌紗布覆蓋固定，取材時(shí)間于縫合后第2天、第4天，緊貼縫線周邊剪下皮膚全層組織，分兩份擬做相關(guān)檢查。皮膚病理切片（HE染色），了解實(shí)驗(yàn)組及對(duì)照組炎性細(xì)胞浸潤(rùn)情況；Elisa法測(cè)定皮膚組織中 MMP-2、MMP-9，了解MMP-2、MMP-9的定量表達(dá)；3.免疫組化法（immunohistochemistry, IHC）,了解皮膚

5、組織中的MMP-2、MMP-9的定位表達(dá)。
　　結(jié)果：⑴大體上觀察，實(shí)驗(yàn)組大鼠較對(duì)照組大鼠，精神偏差，活動(dòng)遲緩。⑵MMP-2、MMP-9的定量分析（Elisa）：與各自對(duì)照組相比，縫線組及張力組MMP-2、MMP-9表達(dá)明顯增高，比較有顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P<0.01）。組內(nèi)相比，縫線組中0號(hào)絲線組與4-0無(wú)損傷縫線組比較比較有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）,張力組組內(nèi)高張力組與低張力組比較有顯著差異（P<0.01），各組 MMP-2、M

6、MP-9的表達(dá)在各時(shí)相點(diǎn)有增多趨勢(shì)，但無(wú)差異（P>0.05）。⑶MMP-2、MMP-9的定位分析（免疫組化）：正常皮膚組織基本不表達(dá)MMP-2、MMP-9，或者僅有少量微弱的表達(dá)；創(chuàng)傷后MMP-2主要表達(dá)于基底膜、真皮內(nèi)的成纖維細(xì)胞、殘留的毛囊細(xì)胞周及滲出炎癥細(xì)胞中，在多形核粒細(xì)胞中表達(dá)多；MMP-9主要主要分布于胞質(zhì)中，細(xì)胞核少量表達(dá)，主要表達(dá)于炎癥細(xì)胞，上皮細(xì)胞也有少量表達(dá)，部分見于細(xì)胞外。⑷皮膚HE切片:實(shí)驗(yàn)組皮下血管擴(kuò)張明顯，炎