MMP-2及MMP-9在缺血再灌注大鼠腦中的表達(dá)及意義.pdf

1、中國(guó)醫(yī)科大學(xué)碩士學(xué)位論文MMP2及MMP9在缺血再灌注大鼠腦中的表達(dá)及意義姓名：周進(jìn)申請(qǐng)學(xué)位級(jí)別：碩士專(zhuān)業(yè)：神經(jīng)病學(xué)指導(dǎo)教師：張朝東2002.4.1分離ICA的頸外分支翼腭動(dòng)脈(PPA)，穿線沿其起點(diǎn)結(jié)扎，ECA近端備線，用動(dòng)脈夾暫時(shí)阻斷CCA及ICA，輕輕向下?tīng)坷璄CA殘端在ECA剪一小口，將制備好的直徑02mm，頭端05nun的尼龍插入ECA，扎緊備線，放開(kāi)動(dòng)脈夾，輕輕推進(jìn)尼龍線，經(jīng)CCA分叉處通過(guò)ICA人顱至大腦前動(dòng)脈(ACA)，

2、斷右側(cè)大腦中動(dòng)脈(MCA)所有血液來(lái)源，尼龍線插入深度距分叉為185405mm，縫合皮膚，外留1cm長(zhǎng)尼龍線頭。缺血時(shí)間為90分鐘。再灌注時(shí)輕輕提拉所留線頭，至到有阻力時(shí)提示及尼龍線尖端已至頸外動(dòng)脈殘端。如動(dòng)物已清醒，需再次麻醉后再灌注。假手術(shù)除不插尼龍線外其余步驟同上。三、免疫組染色：取相鄰切片分別進(jìn)行MMP一9兔多抗及MMP一2染色。具體步驟：1用二甲苯及乙醇處理標(biāo)本脫石臘23％過(guò)氧化氫孵育5分鐘，消除內(nèi)源性過(guò)氧化物酶活性3蒸餾水沖

3、洗，001MPBS緩沖液沖洗3次，每次5分鐘。4封閉用10％正常羊血清工作液室溫孵育10分鐘。5滴加兔抗鼠MMP一9IgG及MMP一21[gG一抗工作液(1：50稀釋)室溫孵育過(guò)夜。6001MPBS緩沖液沖洗3次，每次5分鐘。7滴加生物素標(biāo)記的第二抗體，37。C孵育30分鐘。8001MPBS緩沖液沖洗3次，每次5分鐘。9滴加辣根過(guò)氧化物酶標(biāo)記的鏈霉卵白素37。C孵育30分鐘。10001MPBS緩沖液沖洗3次，每次5分鐘。11滴加新鮮配制