單細(xì)胞聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)在胚胎植入前診斷研究中的應(yīng)用.pdf

1、就單細(xì)胞PCR植入前診斷而言,由于檢材有限,因此在擴(kuò)增效率與準(zhǔn)確性方面有很高的要求.目前,運(yùn)用這一技術(shù)主要面臨兩個問題:污染和無擴(kuò)增. 為了進(jìn)行植入前診斷的應(yīng)用,該文圍繞上述兩個方面,從以下兩部分進(jìn)行了研究和探索. 第一部分:無污染、高效單細(xì)胞PCR體系的建立在建立無污染PCR工作體系的基礎(chǔ)上,吸取人單個淋巴細(xì)胞或人胚胎單卵裂球,采用堿裂解、蛋白酶K裂解和改良的蛋白酶K裂解三種不同細(xì)胞裂解方法進(jìn)行細(xì)胞裂解,隨后以Hotstar酶結(jié)合巢式

2、PCR擴(kuò)增人腎上腺腦白質(zhì)營養(yǎng)不良(Adrenoleukodystrophy,ALD)基因的3號外顯子全編碼區(qū),通過觀察其有效擴(kuò)增率來比較不同裂解體系的細(xì)胞裂解效率.第二部分:單細(xì)胞PCR在單基因病植入前診斷研究中的應(yīng)用:在建立了高效單細(xì)胞PCR體系的基礎(chǔ)上,我們以人單個淋巴細(xì)胞或人胚胎單卵裂球?yàn)檠芯繉ο?選取了幾種該實(shí)驗(yàn)室已經(jīng)建立了基因診斷方法、發(fā)病率較高、較為典型的幾種單基因病進(jìn)行研究.上述研究結(jié)果表明,以堿裂解為基礎(chǔ)的單細(xì)胞PCR體