抗原捕獲反轉錄聚合酶鏈式反應（AC-RT-PCR）檢測口蹄疫病毒方法的建立.pdf

1、試驗采用BHK<,21>細胞增殖口蹄疫病毒(Foot-and-mouth disease virus,FMDV),經PEG-6000沉淀、差速離心和蔗糖密度梯度離心等方法提純FMDV 146S,免疫動物,制備抗血清;通過飽和硫酸銨粗提、sephadex G-25除鹽、DEAE-纖維素柱層析等提取IgG,包被滅菌的Eppendorf管捕獲病毒;在FMDV的核苷酸序列相對保守區(qū)設計上下游引物FM1/FM4,擴增病毒的基因片段.從而建立了檢測

2、FMDV的抗原捕獲反轉錄聚合酶鏈式反應(Antigen capture reverse transcriptase/polymerase chain reaction,AC-RT/PCR)診斷方法.經抗體包被效果、抗原捕獲效果、抗體包被管存放期、敏感性和特異性、田間樣品的檢測等試驗,結果表明:Eppendorf管經戊二醛固定和BSA封閉處理后可以提高抗體包被效果和捕獲抗原效果;抗體包被管放置室溫過夜或放置室溫1月后仍具有捕獲抗原的能力;