聚合酶鏈反應(yīng)中抑制物的檢測(cè)及去除方法研究.pdf

1、第一軍醫(yī)大學(xué)碩士學(xué)位論文聚合酶鏈反應(yīng)中抑制物的檢測(cè)及去除方法研究姓名：李海軍申請(qǐng)學(xué)位級(jí)別：碩士專業(yè)：病理學(xué)指導(dǎo)教師：趙彤20040518聚合酶鏈反應(yīng)中摔制物的檢測(cè)及去除方法研究研究生李海軍導(dǎo)師趙彤教授中文摘要目的：惡性淋巴瘤一直是病理診斷的難點(diǎn)。PCR以其快速、靈敏、易于掇佟等優(yōu)點(diǎn)成為眾多領(lǐng)域的蘺選按術(shù)。避年來(lái)，PCR梭測(cè)基因重舞已經(jīng)成為漭巴瘤診斷不可缺少的手段。然兩，稷陰性一謄怒困擾PCR結(jié)果的問(wèn)題之一。尤熬是由于PCR抑制物的存徑，

2、常常導(dǎo)致PCR出現(xiàn)假陰性結(jié)果，影響、淋巴瘢的正確診齡。墾前，關(guān)予擲案《物問(wèn)題，國(guó)內(nèi)尚未見(jiàn)系統(tǒng)研究。困詫，翔何撿出DNA援稅中摔熹l銹的存在，通過(guò)必要的方法使之去除，同時(shí)探究導(dǎo)致PCR假陰性的其他因素，改進(jìn)固定、DNA提取以及PCR反應(yīng)中的不適環(huán)節(jié)，從露提高基因黧攙的陽(yáng)性率，成為本課題研究的熏點(diǎn)內(nèi)容。方法；(1)構(gòu)建一含有Bg]obin基因片段的重組質(zhì)粒，作為檢測(cè)DNA撼取物中是否禽商PCR抑制物的內(nèi)對(duì)照，在PCR反應(yīng)中終為目的基因擴(kuò)璜的

3、模板。透淑以游巴組織為主的新鮮及石蟮組織進(jìn)行分組，有秘的地對(duì)新切蠟片和陳舊蠟片設(shè)立對(duì)照，常規(guī)PCR篩查陰性標(biāo)本，加入內(nèi)對(duì)照體系檢測(cè)抑制乍用的有無(wú)。(2)以漤巴癯綴腱系DG75綱飚DNA住為PCR反應(yīng)的模扳，選擇淘定、包理、HE染甑以及消化裂解法、酚／氯仿抽掇法提取DNAj建程中所用化舉試劑10％禍爾馬林，95％Z醇，二甲苯，蘇木豢，伊紅，Tris。HCl，EDTA，苯酚，氯鑄，2％SDS，分剮取l難倍眈稀釋為l：10，l：50，1：10