趨化因子CXCL12及其受體CXCR4對(duì)子宮內(nèi)膜癌細(xì)胞株生物學(xué)行為的調(diào)控.pdf

1、目的:本研究通過(guò)應(yīng)用外源性趨化因子CXCL12及其受體CXCR4拮抗劑AMD3100調(diào)控子宮內(nèi)膜癌中CXCL12/CXCR4生物學(xué)軸，并利用RNA干擾技術(shù)下調(diào)CXCR4基因的表達(dá)，探討其對(duì)子宮內(nèi)膜癌細(xì)胞系生物學(xué)特性的影響。
　　 方法:①通過(guò)RT-PCR及western blot檢測(cè)人子宮內(nèi)膜癌細(xì)胞株中趨化因子受體CXCR4的表達(dá)，ELISA法檢測(cè)Ishikawa細(xì)胞在不同培養(yǎng)時(shí)間上清液中CXCL12的分泌水平;
　　

2、②通過(guò)MTT法及Transwell小室檢測(cè)外源性CXCL12及AMD3100對(duì)Ishikawa細(xì)胞增殖、遷移及侵襲的影響;
　　 ③針對(duì)人CXCR4基因設(shè)計(jì)合成靶向特異性小分子干擾RNA，利用Lipofectamine2000脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染劑轉(zhuǎn)染至人子宮內(nèi)膜癌Ishikawa細(xì)胞株，應(yīng)用RT-PCR及western blot檢測(cè)干擾效果;
　　 ④通過(guò)RT-PCR和western blot分析Ishikawa細(xì)胞株沉默CXC

3、R4mRNA基因表達(dá)前后CXCR4在mRNA及蛋白水平表達(dá)變化，MTT法及Tran swell侵襲實(shí)驗(yàn)觀察轉(zhuǎn)染后細(xì)胞株增殖及趨化、侵襲能力的變化，流式細(xì)胞儀檢查Ishikawa細(xì)胞株細(xì)胞周期和細(xì)胞凋亡水平變化。
　　 結(jié)果:①I(mǎi)shikawa和HEC-1-A細(xì)胞均見(jiàn)CXCR4mRNA表達(dá)，而未見(jiàn)CXCL12表達(dá)，Ishikawa細(xì)胞可持續(xù)分泌CXCL12;
　　 ②外源性CXCL12促進(jìn)Ishikawa細(xì)胞的增殖、遷移及

4、侵襲，AMD3100可抑制CXCL12的促增殖、遷移及侵襲作用;
　　 ③針對(duì)CXCR4基因序列設(shè)計(jì)特異性小分子干擾RNA轉(zhuǎn)染Ishikawa細(xì)胞株后，CXCR4基因的mRNA及蛋白表達(dá)量受到明顯抑制，而空白組和對(duì)照組比較CXCR4基因水平無(wú)明顯改變;
　　 ④在MTT及Transwell趨化侵襲實(shí)驗(yàn)中，轉(zhuǎn)染小分子干擾RNA的細(xì)胞株增殖能力和趨化侵襲能力明顯降低，流式細(xì)胞儀檢測(cè)觀察子宮內(nèi)膜癌Ishikawa細(xì)胞周期出現(xiàn)S