催乳素釋放肽在雌鼠動情周期及針刺調(diào)整HPOA異常功能中的作用.pdf

1、目的：本文以具有正常動情周期的雌性大鼠和去卵巢大鼠為模型，觀察腦內(nèi)催乳素釋放肽(prolactinreleasingpeptide，PrRP)及其受體GPR10(G-proteincoupledreceptor10)是否參與雌性大鼠動情周期的調(diào)節(jié)和電針對下丘腦—垂體—卵巢軸(hypothalamic-pituitary-ovarianaxis，HPOA)異常功能的調(diào)節(jié)，探討腦內(nèi)PrRP在動情周期調(diào)節(jié)中可能的生理作用，拓展對PrRP及其受

2、體的生物學(xué)功能的認(rèn)識，進(jìn)一步闡明電針作用的神經(jīng)內(nèi)分泌機制。方法：(1)成年雌性SD大鼠，隨機分為正常組(INT)、正常加電針組(INT+EA)、去卵巢組(OVX)、去卵巢加電針組(OVX+EA)。電針組穴位選用“關(guān)元”、“中極”、“子宮”和“三陰交”，于每天上午8：00-10：00給予電針，每天一次，每次30分鐘，連續(xù)3天；電刺激電流為連續(xù)波，頻率2Hz，刺激強度為1～2mA，以動物下肢輕微抖動為度。采用免疫組織化學(xué)、實時定量PCR、放

3、射免疫分析等方法，觀察了大鼠腦內(nèi)PrRP在延髓和下丘腦相關(guān)核團(tuán)蛋白和mRNA表達(dá)的變化。(2)成年的雌性SD大鼠經(jīng)陰道脫落細(xì)胞組織學(xué)檢查，分為動情間期組(diestrusstage，DI)、動情前期組(proestrusstage，P)、動情期組(estmsstage，E)和動情后期組(metaestrusstage，M)，采用免疫組織化學(xué)和RT-PCR觀察正常大鼠動情周期不同時相延髓和下丘腦相關(guān)核團(tuán)PrRP及其受體GPR10的免疫陽性

4、細(xì)胞和mRNA表達(dá)的變化。(3)采用免疫熒光雙標(biāo)結(jié)合激光共聚焦、離體腦片孵育和高效液相電化學(xué)法和熒光法、放射免疫分析法等，探討大鼠腦內(nèi)PrRP參與調(diào)節(jié)HPOA功能的可能機制。結(jié)果：(1)大鼠切除卵巢后，垂體LH出現(xiàn)超常分泌、血中雌二醇水平明顯下降，子宮臟器系數(shù)下降，子宮形態(tài)結(jié)構(gòu)改變。電針處理后，LH的超常分泌受到明顯抑制，雌二醇水平有一定程度的升高，子宮臟器系數(shù)增加，子宮形態(tài)結(jié)構(gòu)趨于正常。而正常組與正常加電針組之間沒有明顯差異；(2)去

5、卵巢大鼠延髓孤束核和腹外側(cè)網(wǎng)狀核PrRP免疫陽性細(xì)胞數(shù)顯著低于正常組，下丘腦終紋床核PrRP免疫陽性纖維平均光密度也降低。電針后，上述指標(biāo)有不同程度的增加；(3)與正常組相比，去卵巢大鼠的延髓和下丘腦PrRPmRNA的水平明顯降低，而去卵巢加電針組的PrRPmRNA水平顯著回升；(4)動情前期組延髓孤束核和腹外側(cè)網(wǎng)狀核的PrRP免疫陽性細(xì)胞數(shù)明顯減少，下丘腦終紋床核PrRP免疫陽性纖維平均光密度也減少；(5)動情前期組和動情期組的延髓和

6、下丘腦PrRPmRNA的水平明顯增高；(6)大鼠腦內(nèi)PrRP受體—GPR10的表達(dá)在動情周期中未見明顯變化；(7)在雌性大鼠的下丘腦內(nèi)側(cè)視前區(qū)，觀察到PrRP受體——GPR10與GnRH共存于同一細(xì)胞中；(8)在去卵巢大鼠的離體下丘腦腦片中，加入不同濃度的PrRP-31可以明顯抑制GnRH的超常釋放，并呈明顯的量效關(guān)系；在離體垂體培養(yǎng)的孵育液中，加入不同濃度的PrRP-31對垂體LH的釋放無影響；(9)不同劑量的PrRP-31可引起去卵

7、巢大鼠下丘腦腦片孵育的孵育液中，單胺類遞質(zhì)和氨基酸類遞質(zhì)的含量發(fā)生改變。結(jié)論：(1)腦內(nèi)PrRP可能參與了電針調(diào)整去卵巢大鼠HPOA異常功能的神經(jīng)內(nèi)分泌機制，通過抑制下丘腦GnRH的超常釋放，使垂體LH的過高分泌降低；(2)腦內(nèi)PrRP可能通過調(diào)節(jié)GnRH峰的形成，參與了生理狀態(tài)下動情周期的調(diào)節(jié)；(3)腦內(nèi)PrRP在生理雌激素水平下，可促進(jìn)GnRH的釋放；在低雌激素水平時，可抑制GnRH的超常釋放，其作用可能是通過PrRP受體直接介導(dǎo)的