外源性內(nèi)脂素對(duì)高齡雌鼠卵巢功能的影響.pdf

1、目的：通過(guò)檢測(cè)注射外源性內(nèi)脂素的高齡雌鼠卵巢組織血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子（vascular endothelial growth factor，VEGF）和內(nèi)分泌腺性血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子（endocrine gland vascular endothelial growth factor，EG-VEGF）的表達(dá)來(lái)探討內(nèi)脂素對(duì)高齡雌鼠卵巢功能和卵子質(zhì)量的影響，為臨床促排卵中卵巢低反應(yīng)患者的用藥提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。
　　方法：將兩組不同周齡段（12～1

2、6周，32～36周）的SPF級(jí)雌性SD大鼠每組各60只，每組內(nèi)再隨機(jī)分為兩組。在誘導(dǎo)排卵的基礎(chǔ)上，應(yīng)用外源性內(nèi)脂素的作為治療組，將僅誘導(dǎo)排卵的一組作為對(duì)照組。第一步，誘導(dǎo)排卵，于發(fā)情期給予四組雌性 SD大鼠腹腔內(nèi)注射15IU孕母馬血清促性腺激素，同時(shí)，治療組予100ng/ml重組鼠內(nèi)脂素。第二步，注射48小時(shí)后，向治療組與對(duì)照組大鼠腹腔內(nèi)注射50IU人絨毛膜促性腺激素（HCG）。第三步，立即將這些雌鼠和雄鼠進(jìn)行單獨(dú)交配。第四步，交配18

3、小時(shí)后，頸椎脫臼處死雌鼠，無(wú)菌條件下取出雙側(cè)輸卵管中的受精卵進(jìn)行體外培養(yǎng)；取出雙側(cè)卵巢，右側(cè)卵巢用甲醛固定，免疫組化檢測(cè)微血管密度（MVD），左側(cè)卵巢的一部分立即置于Trizol中，用于Realtime-PCR檢測(cè)卵巢VEGF、EG-VEGF的mRNA表達(dá)，另一部分則用于Western Blotting檢測(cè)VEGF、EG-VEGF的蛋白表達(dá)。實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)采用SPSS17.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，計(jì)量資料以平均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（(x)±s）表示，采用

4、單因素方差分析判斷組間差異，兩組間數(shù)據(jù)比較采用SNK檢驗(yàn)，P<0.05認(rèn)為有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　結(jié)果：1、年輕對(duì)照組平均合子數(shù)、卵裂數(shù)、卵裂率、平均胚胎數(shù)高于大齡對(duì)照組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），大齡治療組高于大齡對(duì)照組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）；而年輕治療組、年輕對(duì)照組兩組之間比較，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。2、年輕對(duì)照組卵巢 MVD、VEGF及 EG-VEGF的表達(dá)水平高于大齡對(duì)照組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P

5、＜0.05），大齡治療組高于大齡對(duì)照組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）；而年輕治療組、年輕對(duì)照組兩組之間比較，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。
　　結(jié)論：1、誘導(dǎo)排卵的高齡雌鼠的平均合子數(shù)、卵裂數(shù)、卵裂率、平均胚胎數(shù)隨周齡的增加而下降，提示高齡雌鼠生殖能力下降。2、給予外源性內(nèi)脂素后治療組高齡雌鼠的平均合子數(shù)、卵裂數(shù)、卵裂率、平均胚胎數(shù)明顯增加，提示外源性內(nèi)脂素可能改善高齡雌鼠卵巢功能，提高其生殖能力。3給予外源性內(nèi)脂素后高齡