血壓的腎臟調(diào)節(jié)：miR-29參與高血壓腎損傷的機(jī)制及Renalase與ESRD患者自主神經(jīng)活性的關(guān)系.pdf

1、第一部分 TNFα及其受體在SS及SS-13BN大鼠腎髓質(zhì)的表達(dá)
　　目的：檢測(cè)并比較TNFα及其受體TNFRSF1A在SS及SS-13BN大鼠腎髓質(zhì)的表達(dá)。方法：1將SS及SS-13BN大鼠（n=9）分為4組：SS低鹽飲食（0.4％）組、SS高鹽飲食（4%）組、SS-13BN低鹽飲食（0.4%）組、SS-13BN高鹽飲食（4%）組。所有大鼠以低鹽飲食喂養(yǎng)至7周齡，處死低鹽組大鼠并分離腎髓質(zhì)組織。換高鹽飲食喂養(yǎng)高鹽組大鼠至8周齡，

2、處死大鼠并分離腎髓質(zhì)組織。2將SS大鼠（n=6）分為3組：低鹽飲食（0.4%）組、高鹽（4%）3天組、高鹽（4%）7天組。所有大鼠以低鹽飲食喂養(yǎng)至6周齡，處死低鹽組大鼠。換高鹽飲食，并于高鹽3天、7天分別處死高鹽組大鼠并分離腎髓質(zhì)組織。利用實(shí)時(shí)定量PCR技術(shù)檢測(cè)各組腎髓質(zhì)TNFα及其受體TNFRSF1A的表達(dá)。結(jié)果：SS大鼠高鹽7天后腎臟外髓部的TNFα水平顯著高于低鹽組，且這種變化不存在于 SS-13BN大鼠中。SS大鼠高鹽3天組腎髓

3、質(zhì) TNFα較低鹽組無顯著變化；且SS大鼠高鹽7天組的腎髓質(zhì)TNFα水平顯著高于高鹽3天組及低鹽組；TNFRSF1A在各組變化均無顯著差異。結(jié)論：腎髓質(zhì)的TNFα表達(dá)水平在SS大鼠高鹽飲食3-7天內(nèi)迅速上升，并顯著高于低鹽組。TNFα可能在SS大鼠血壓調(diào)節(jié)及腎臟損傷過程中起重要作用
　　第二部分 TNFα對(duì)mTAL細(xì)胞miR-29家族及纖維化相關(guān)基因的影響
　　目的：探討TNFα對(duì)mTAL細(xì)胞miR-29家族及纖維化相關(guān)基因

4、的影響。方法：培養(yǎng)mTAL細(xì)胞并以TNFα刺激24h、48h，檢測(cè)各組細(xì)胞中miR-29及纖維化相關(guān)基因的表達(dá)；培養(yǎng)mTAL細(xì)胞，過表達(dá)miR-29并以TNFα刺激24h，檢測(cè)各組細(xì)胞中纖維化相關(guān)基因的表達(dá)；培養(yǎng)mTAL細(xì)胞，轉(zhuǎn)染NFkB p65 siRNA并以TNFα刺激24h，檢測(cè)各組細(xì)胞中miR-29及纖維化相關(guān)基因的表達(dá)。結(jié)果：TNFα刺激 mTAL細(xì)胞24小時(shí)或48小時(shí)，能顯著下調(diào) miR-29家族基因的表達(dá)，且上調(diào)纖維化相關(guān)

5、基因Acta2、Col4a1、Col4a2的水平；過表達(dá)miR-29a能顯著下調(diào)Acta2、Fn1、Col4a1、Col4a2的基因表達(dá)；過表達(dá)的miR-29c能顯著下調(diào)Col4a1、Col4a2的基因表達(dá)，且miR-29c顯著減輕了TNFα誘導(dǎo)的Col4a1、Col4a2的上調(diào)；NFkB p65 siRNA轉(zhuǎn)染顯著上調(diào)miR-29、下調(diào)Col4a1、Col4a2，且逆轉(zhuǎn)由TNFα下調(diào)的miR-29的表達(dá)。結(jié)論：TNFα可能通過NF-κ

6、B途徑下調(diào)miR-29的表達(dá)；NF-κB途徑的抑制可能對(duì)腎臟纖維化起保護(hù)作用；Acta2、Fn1可能是miR-29a的潛在靶基因；miR-29c對(duì)TNFα誘導(dǎo)的纖維化有保護(hù)作用。
　　第三部分 TNFα抑制劑依那西普腎內(nèi)注射對(duì)SS大鼠血壓、miR-29及腎損傷的影響
　　目的：探討TNFα抑制劑依那西普腎內(nèi)注射對(duì)SS大鼠血壓、miR-29及腎損傷的影響。方法：將SS大鼠分為依那西普組和生理鹽水對(duì)照組（n=6）。以低鹽飲食（0

7、.4%）喂養(yǎng)至6周齡，行右腎切除術(shù)。繼續(xù)喂養(yǎng)至7周齡，行股動(dòng)脈置管測(cè)壓術(shù)及腎內(nèi)導(dǎo)管植入術(shù)。術(shù)后7天開始測(cè)量血壓。記錄基礎(chǔ)血壓3天后開始腎內(nèi)注射依那西普，并于依那西普處理后3天換高鹽飲食（4%）繼續(xù)喂養(yǎng)2周。處死大鼠并收集組織，分析各組大鼠血壓、miR-29及腎損傷的變化。結(jié)果：腎內(nèi)注射依那西普能顯著降低SS大鼠血壓；依那西普處理組呈現(xiàn)出蛋白管型、腎髓質(zhì)纖維化減輕的趨勢(shì)；腎臟內(nèi)髓的miR-29家族在依那西普組呈現(xiàn)上升趨勢(shì)，且纖維化相關(guān)基因

8、呈現(xiàn)下調(diào)趨勢(shì)。結(jié)論：腎內(nèi)TNFα在SS大鼠血壓調(diào)節(jié)過程中起重要作用；依那西普可能通過降低血壓、上調(diào)miR-29表達(dá)從而減輕腎臟纖維化。
　　第四部分 Renalase與終末期腎病患者自主神經(jīng)活性的關(guān)系
　　目的：探討Renalase與終末期腎病患者自主神經(jīng)活性的關(guān)系。方法：選擇2011年7月至2012年6月期間于上海市第六人民醫(yī)院腎臟內(nèi)科治療的ESRD患者30例及健康志愿者16例。其中行血液透析者14例，腹膜透析者16例。對(duì)

9、所有入選者行24小時(shí)動(dòng)態(tài)心電圖監(jiān)測(cè)以分析SDNN、RMSSD、PNN50等心率變異性指標(biāo)，并檢測(cè)患者血紅蛋白、血脂、血肌酐等生化代謝指標(biāo)及血清 renalase、兒茶酚胺水平，分析renalase與其他參數(shù)的相關(guān)性。結(jié)果：血液透析及腹膜透析患者的Max-HR、Min-HR和Ave-HR均顯著高于健康對(duì)照組，且SDNN、RMSSD和PNN50較健康對(duì)照組顯著降低；血液透析及腹膜透析患者的血清renalase與Ave-HR顯著負(fù)相關(guān)，與SD