琥珀酸產(chǎn)生菌的分離鑒定、誘變選育及發(fā)酵條件優(yōu)化.pdf

1、細(xì)菌發(fā)酵生產(chǎn)琥珀酸成本低廉、對環(huán)境污染少。由于其生產(chǎn)原料可再生，并能吸收利用溫室氣體CO<,2>，使之成為近年來國內(nèi)外生物質(zhì)能源轉(zhuǎn)化的研究熱點(diǎn)?！狙芯客ㄟ^采用選擇性較強(qiáng)的富集培養(yǎng)和快速準(zhǔn)確篩選程序，從牛瘤胃中分離出適于淀粉質(zhì)原料的琥珀酸產(chǎn)生菌，并進(jìn)行相關(guān)的生理生化鑒定：通過紫外照射誘變育種得到琥珀酸高產(chǎn)突變株，優(yōu)化培養(yǎng)基組成并確定最適發(fā)酵培養(yǎng)條件。主要研究結(jié)論如下： 1．在富集培養(yǎng)中添加莫能菌素和富馬酸鈉，經(jīng)溴甲酚綠變色平板快

2、速檢出500株產(chǎn)酸菌株。菌株發(fā)酵后經(jīng)TLC初篩和改進(jìn)后的HPCE方法復(fù)篩檢測，得到6株優(yōu)良產(chǎn)酸菌株，其中B-15菌株產(chǎn)琥珀酸11.5 g·L<'-1>，副產(chǎn)物甲酸4.65 g·L<'-1>，乙酸6.25 g·L<'-1>，該菌株琥珀酸產(chǎn)量最高。菌株B-15經(jīng)生理生化鑒定后，初步確定其為放線桿菌屬(Actinobacillus sp．)。 2．以B-15為出發(fā)菌株，通過紫外照射誘變，依次采用溴甲酚綠平板、氟乙酸平板和丙烯醇平板對

3、菌株進(jìn)行定向選育，得到的突變株FB-4發(fā)酵產(chǎn)琥珀酸19.90 g·L<'-1>，副產(chǎn)物乙醇7.55 g·L<'-1>，甲酸2.05 g·L<'-1>，乙酸4.85 g·L<'-1>，其琥珀酸產(chǎn)量較原始菌株提高70％。 3．對突變株FB-4進(jìn)行發(fā)酵試驗(yàn)的結(jié)果表明，最佳發(fā)酵培養(yǎng)基組成為，葡萄糖50 g·L<'-1>，酵母提取物10 g·L<'-1>，玉米漿5 g·L<'-1>，K<,2>HPO<,4> 3g·L<'-1>，MgCl