納豆菌的誘變選育及發(fā)酵工藝條件的研究.pdf

1、本研究采用物理化學誘變方法，對納豆菌進行復(fù)合誘變處理，以期從中篩選出納豆激酶(NK)活力高和抑菌效果好的優(yōu)良菌株。以實驗室分離、篩選的納豆菌NK-9作為出發(fā)菌，通過紫外線和氯化鋰對其進行復(fù)合誘變，經(jīng)過菌種的初篩和復(fù)篩，得到了納豆激酶活力較出發(fā)菌提高了2.2倍的菌株 JN-14和抑菌活性提高16.904的菌株 JN-11。并研究了兩菌株產(chǎn)納豆激酶和抑菌活性物質(zhì)的發(fā)酵過程；比較了不同的營養(yǎng)源與生長條件對兩菌株合成活性產(chǎn)物的影響，優(yōu)化、確定了

2、菌株合成有效代謝產(chǎn)物的發(fā)酵培養(yǎng)基。并對初始菌株與誘變菌株進行了比較。 采用纖維蛋白—瓊脂糖平板方法和管碟法分別測定本實驗室分離篩選的8個納豆菌的產(chǎn)酶活力和抑菌能力，確定納豆菌NK-9為出發(fā)菌。其菌懸液經(jīng)紫外線輻照12s后，涂布于含0.3％LiCl初篩培養(yǎng)基。結(jié)合牛奶蛋白平板法和瓊脂塊法從幾百株存活菌中初篩得到40株誘變菌株。經(jīng)搖瓶發(fā)酵測定NK活性和抑菌活性進行復(fù)篩，最后分別得到2株生產(chǎn)性能較出發(fā)菌株顯著提高的突變株 JN-14

3、和 JN-11，其中產(chǎn)酶能力最高的變株JN-14酶活達到1155.0IU/ml，而抑菌能力最強的 JN-11抑制大腸桿菌的抑菌圈直徑達到23.62mm。 通過液態(tài)搖瓶發(fā)酵確定 JN-14的最適產(chǎn)酶條件：麥芽糖和蛋白胨分別為 JN-14產(chǎn)酶的最佳碳源和氮源。當培養(yǎng)基中的碳氮比為1∶2時最有利于產(chǎn)酶。此外，實驗還研究了產(chǎn)酶的最適接種量、種齡、初始pH值、表面活性劑以及培養(yǎng)溫度和搖床轉(zhuǎn)數(shù)等發(fā)酵條件。當在培養(yǎng)發(fā)酵液中添加0.3％的吐溫-

4、40時，對產(chǎn)酶有微弱促進作用。最后通過正交實驗確定了發(fā)酵產(chǎn)酶的最適培養(yǎng)條件為：麥芽糖1％，蛋白胨2％，NaCl 0.5％，K<,2>HPO<,4>0.3％，KH<,2>PO<,4> 0.1％，MgSO<,4> 0.05％，培養(yǎng)基初始pH7.0，種齡20hr，接種量2％，培養(yǎng)溫度37℃，搖床轉(zhuǎn)數(shù)120rpm/min。在此條件下發(fā)酵產(chǎn)酶，培養(yǎng)到72hr達到產(chǎn)酶的最高峰，此時的酶活力達到1828.4IU/ml。 而JN-11產(chǎn)抑菌活性