海洋溶菌酶產(chǎn)生菌YJ007的選育、鑒定和發(fā)酵條件優(yōu)化.pdf

1、本論文對(duì)一株產(chǎn)溶菌酶的海洋芽孢桿菌進(jìn)行了選育、鑒定和發(fā)酵條件優(yōu)化的研究，為海洋微生物溶菌酶的研究和應(yīng)用奠定了基礎(chǔ)。 以一株產(chǎn)溶菌酶的海洋芽孢桿菌S-12-86為出發(fā)菌株，對(duì)其進(jìn)行原生質(zhì)體的制備和再生。結(jié)果表明原生質(zhì)體的最佳制備條件為：以菌株S-12-86培養(yǎng)18h，采用溶菌酶液與菌液1:1配比，溶菌酶濃度為1.0mg/mL，在35℃下，酶解30min，原生質(zhì)體形成率為97.6％，再生率為23.6％。將此條件下獲得的原生質(zhì)體于30

2、W紫外燈下80cm照射120s進(jìn)行誘變處理。誘變處理后初篩復(fù)篩，并結(jié)合產(chǎn)酶性能穩(wěn)定性分析，獲得了一株產(chǎn)溶菌酶活性比原始菌株提高46.8％且性能穩(wěn)定的突變菌株YJ007。 對(duì)篩選出的高產(chǎn)菌株YJ007進(jìn)行其形態(tài)觀察和部分生理生化指標(biāo)的測定以及系統(tǒng)發(fā)育學(xué)分析。結(jié)果表明，該菌株具有典型的芽孢桿菌屬的形態(tài)學(xué)特征；YJ007的16SrDNA序列在GenBank的注冊(cè)號(hào)為EU016215，與BacilluslicheniformisDSM1

3、3T(X68416)同源性高達(dá)99.68％，確定為地衣芽孢桿菌(B.licheniformis)。 采用單因素實(shí)驗(yàn)對(duì)突變株YJ007的產(chǎn)酶條件進(jìn)行了研究，得到其最佳培養(yǎng)基成份：玉米粉、蛋白胨、牛肉膏、NaCl、MgSO4；最佳培養(yǎng)條件：初始pH值為7.5，溫度為30℃，轉(zhuǎn)速為200r/min，接種量為6％，接種時(shí)間為18～20h，發(fā)酵培養(yǎng)時(shí)間為20～22h。在此基礎(chǔ)上采用二次回歸正交設(shè)計(jì)對(duì)突變株YJ007的發(fā)酵培養(yǎng)基進(jìn)行了優(yōu)化。