IL-35在活動(dòng)性肺結(jié)核患者外周血中的表達(dá)及其臨床意義.pdf

1、IL-35是新近發(fā)現(xiàn)的免疫抑制性細(xì)胞因子，由EB13和p35亞基組成。已報(bào)道鼠調(diào)節(jié)性T細(xì)胞（RegulatoryT cells，Treg）和經(jīng)抗原刺激的人Treg均能分泌IL-35，但未經(jīng)抗原刺激的人Treg卻不能分泌IL-35。最近有學(xué)者發(fā)現(xiàn)B細(xì)胞亦能分泌IL-35。IL-35可負(fù)向調(diào)節(jié)免疫功能，在維持機(jī)體內(nèi)環(huán)境免疫平衡和免疫性/炎癥性疾病發(fā)生發(fā)展中發(fā)揮著重要作用，但其在結(jié)核病中的作用尚未見報(bào)道。本研究以活動(dòng)性肺結(jié)核患者（Active

2、 pulmonary tuberculosis，APTB）為研究對(duì)象，采用ELISA、實(shí)時(shí)熒光定量PCR和流式細(xì)胞術(shù)檢測IL-35在活動(dòng)性肺結(jié)核患者血漿中的水平及其在不同種類白細(xì)胞中的表達(dá)，分析抗結(jié)核治療對(duì)其的影響，并探討其臨床意義，從而為結(jié)核病的預(yù)防、診斷及臨床治療提供理論依據(jù)。
　　[目的]
　　檢測IL-35在活動(dòng)性肺結(jié)核患者血漿中的含量及其在外周血不同種類白細(xì)胞中的表達(dá)情況并探討其臨床意義。
　　[方法]

3、>　　1.研究對(duì)象:按臨床診斷標(biāo)準(zhǔn)選擇活動(dòng)性肺結(jié)核患者作為研究對(duì)象，并根據(jù)不同臨床資料對(duì)患者進(jìn)行分組，如抗結(jié)核藥物(Antituberculosis drugs，ATDs)治療前/后，痰涂片結(jié)核分枝桿菌陽性/陰性，患者性別等。采用健康志愿者(Healthyvolunteers，HV)作為對(duì)照。
　　2.樣本收集和處理:采用EDTA-K2抗凝，收集活動(dòng)性肺結(jié)核患者入院治療前和治療后空腹血樣，健康志愿者體檢時(shí)空腹血樣，分離血漿并采用淋

4、巴細(xì)胞分離液分離外周血單個(gè)核細(xì)胞。
　　3.血漿IL-35水平的檢測:采用人IL-35 ELISA檢測試劑盒，檢測血漿IL-35含量。
　　4.IL-35亞基mRNA的檢測:提取活動(dòng)性肺結(jié)核患者和正常人外周血白細(xì)胞及外周血單個(gè)核細(xì)胞(Peripheral blood mononuclear cell，PBMC)總RNA，經(jīng)逆轉(zhuǎn)錄后，采用實(shí)時(shí)熒光定量PCR檢測IL-35的兩個(gè)亞基p35和EBI3 mRNA的表達(dá)情況。
　

5、　5.IL-35在不同類型淋巴細(xì)胞中的表達(dá):分離活動(dòng)性肺結(jié)核患者和正常人外周血PBMC，采用多色熒光抗體結(jié)合流式細(xì)胞術(shù)檢測并分析樣本中IL-35兩個(gè)亞基p35和EBI3在活動(dòng)性肺結(jié)核患者外周血T細(xì)胞及其亞群，以及在B細(xì)胞中的表達(dá)，并結(jié)合臨床資料分析其臨床意義。
　　[結(jié)果]
　　1.ELISA檢測結(jié)果顯示:活動(dòng)性肺結(jié)核患者血漿IL-35高于健康對(duì)照組，治療后組低于治療前組，痰涂結(jié)核分枝桿菌陽性（痰涂陽性）患者組高于痰涂陰性患

6、者組。
　　2.Real time PCR檢測結(jié)果顯示:活動(dòng)性肺結(jié)核患者外周血總白細(xì)胞及外周血單個(gè)核細(xì)胞中p35與EBI3的mRNA表達(dá)均高于健康對(duì)照組，且EBI3 mRNA在外周血總白細(xì)胞中表達(dá)高于其在PBMC中的表達(dá)。此外，活動(dòng)性肺結(jié)核患者外周血總白細(xì)胞中治療后組p35 mRNA表達(dá)低于治療前組，痰涂陽性患者組高于痰涂陰性患者組;PBMC中治療后組EBI3 mRNA表達(dá)低于治療前組，p35和EBI3 mRNA表達(dá)痰涂陽性患者組

7、均高于痰涂陰性患者組。
　　3.流式細(xì)胞術(shù)檢測結(jié)果顯示:活動(dòng)性肺結(jié)核患者外周血p35+CD4+T細(xì)胞和EBI3+CD4+T細(xì)胞比例均高于健康對(duì)照組，且兩者在活動(dòng)性肺結(jié)核患者中呈正相關(guān)，在健康志愿者中未發(fā)現(xiàn)明顯相關(guān)。痰涂陽性患者p35+CD4+T細(xì)胞比例高于痰涂陰性患者，治療后組低于治療前組。此外，活動(dòng)性肺結(jié)核患者p35+CD4+CD25+T細(xì)胞和EBI3+CD4+CD25+T細(xì)胞比例均高于健康對(duì)照組，兩者在活動(dòng)性肺結(jié)核患者中呈正相

8、關(guān)?；顒?dòng)性肺結(jié)核患者中痰涂陽性患者p35+CD4+CD25+T細(xì)胞比例和EBI3+CD4+CD25+T細(xì)胞比例均高于痰涂陰性患者組，治療后組EBI3+CD4+CD25+T細(xì)胞比例低于治療前組;但幾乎沒有檢測到同時(shí)表達(dá)p35和EBI3的CD4+CD25+T細(xì)胞。
　　流式細(xì)胞術(shù)檢測結(jié)果還顯示:體外經(jīng)BCG刺激后，活動(dòng)性肺結(jié)核患者外周血單個(gè)核細(xì)胞中p35+CD19+B細(xì)胞、EBI3+CD19+B細(xì)胞及p35+EBI3+CD19+B細(xì)胞

9、比例均明顯上調(diào)，且痰涂陽性患者EBI3+CD19+B/p35+EBI3+CD19+B細(xì)胞比例分別高于痰涂陰性患者，治療后組分別低于治療前組。
　　[結(jié)論]
　　1.活動(dòng)性肺結(jié)核患者血漿IL-35含量升高，治療后下降，痰涂陽性患者顯著高于痰涂陰性患者，且IL-35兩個(gè)亞基p35和EBI3 mRNA在活動(dòng)性肺結(jié)核患者外周血白細(xì)胞中的表達(dá)均顯著升高，提示IL-35可能與活動(dòng)性肺結(jié)核患者免疫功能障礙有關(guān)。
　　2.p35和EB

10、I3單亞基在活動(dòng)性肺結(jié)核患者T細(xì)胞及CD4+CD25+T亞群的表達(dá)均升高，且兩者的表達(dá)存在正相關(guān)，提示IL-35及其亞基可能參與T細(xì)胞介導(dǎo)的抗結(jié)核細(xì)胞免疫調(diào)節(jié)。但由于幾乎沒有檢測到同時(shí)表達(dá)IL-35兩個(gè)亞基的T細(xì)胞及T細(xì)胞亞群，提示T細(xì)胞及其亞群有可能不是活動(dòng)性肺結(jié)核患者外周血IL-35的主要來源。
　　3.BCG刺激可顯著上調(diào)IL-35及其兩個(gè)亞基在B細(xì)胞中的表達(dá)，且痰涂陽性患者高于痰涂陰性患者，治療后組低于治療前組，提示活動(dòng)性