建立真核細胞蛋白質組合翻譯后修飾的質譜分析方法.pdf

1、真核細胞內源性蛋白質翻譯后修飾與眾多重大疾病相關聯(lián)因而一直備受關注。破解藥物靶標的翻譯后修飾密碼為藥物設計開辟了新的思路。翻譯后修飾使蛋白的結構變得更加復雜，功能更加多樣，調節(jié)更加細化，作用更加特異。通過系統(tǒng)鑒定與疾病相關的靶標蛋白中翻譯后修飾類型及其修飾位點，比較病理狀態(tài)下靶標蛋白翻譯后修飾水平與正常狀態(tài)中蛋白修飾水平的差異，檢測藥物處理后靶標蛋白翻譯后修飾水平的變化，或許能從另一角度更深入透徹的理解疾病致病機理，促進藥物研發(fā)。然而對

2、翻譯后修飾的確定一直存在諸多困難。伴隨生物質譜技術的不斷完善，它逐漸成為蛋白質翻譯后修飾鑒定的最有力的方法之一。微管蛋白是抗癌類藥物的一種重要靶標蛋白，與其相關的藥物很多，最具代表性的是紫杉醇，它具有聚合和穩(wěn)定細胞內微管的作用。
　　本研究以我們把人源細胞系中表達的微管蛋白作為研究對象，依托WatersSNAPT HDMS系統(tǒng)對其多種翻譯后修飾進行系統(tǒng)鑒定。通過對樣品前處理過程的改進，對后續(xù)色譜質譜檢測參數的優(yōu)化，對所獲的質譜分析

3、數據的可信度驗證篩選原則的完善，建立了一套適用于真核細胞內源性蛋白翻譯后修飾鑒定的最優(yōu)化分析流程。利用這套建立的真核蛋白翻譯后修飾質譜分析流程，我們對模式蛋白的多種翻譯后修飾進行了最系統(tǒng)全面準確的鑒定。在完善翻譯后修飾位點鑒定流程的基礎上，我們進一步探索建立非標記和標記定量蛋白質組學方法，以期對蛋白翻譯后修飾水平進行相對定量比較。
　　總體來說，我們建立了一整套用于真核細胞內源性蛋白翻譯后修飾類型和修飾位點鑒定、修飾水平監(jiān)測的分析