甲狀腺相關(guān)眼病的淚液蛋白質(zhì)譜分析.pdf

1、目的：甲狀腺相關(guān)眼?。═AO）患者臨床常有干澀，畏光，異物感等類似干眼癥的眼表表現(xiàn)。然而，與干眼癥表現(xiàn)所不同的是，TAO患者，淚液分泌量并不減少，在活躍期的患者還會(huì)出現(xiàn)淚液分泌的增多。許多研究表明，TAO眼表面損害可能與淚液成分的改變有關(guān)。淚液中的蛋白質(zhì)在維持眼表健康中起著重要的作用。淚液中的蛋白質(zhì)成分的變化可反映眼表的變化。蛋白質(zhì)組學(xué)研究為識(shí)別淚液中的蛋白質(zhì)提供了一個(gè)非常有價(jià)值的手段，從而為闡明TAO的發(fā)病機(jī)制提供依據(jù)。在這項(xiàng)研究中，

2、蛋白質(zhì)組學(xué)技術(shù)被用來(lái)研究患者淚液中蛋白質(zhì)組的變化。
　　方法：進(jìn)行前瞻性的研究，收集標(biāo)本。淚液樣品采自TAO活躍期的患者和沒(méi)有眼表癥狀的年齡和性別相匹配的健康人群，分別混合分組分析。首先采用MALDI-TOF-TOF質(zhì)譜儀進(jìn)行淚液蛋白的肽段分析，發(fā)現(xiàn)兩組蛋白的肽段質(zhì)譜圖存在明顯的差異。然后行SDS-PAGE凝膠電泳，分別采用8％和15％的凝膠初步分離兩組樣品的蛋白,分為多個(gè)差異蛋白條帶。接著收集標(biāo)記的差異蛋白條帶進(jìn)行凝膠內(nèi)胰蛋白酶

3、消化，由LC-MS/MS系統(tǒng)進(jìn)行質(zhì)譜分析，以確定在每個(gè)差異段中的蛋白質(zhì)組分。Scaffold搜索引擎作為第二個(gè)步驟，分析所有的MS/MS離子光譜，用來(lái)驗(yàn)證基于MS/ MS的肽和蛋白質(zhì)的鑒定。
　　結(jié)果：通過(guò)肽段分析發(fā)現(xiàn)對(duì)照組和病例組出現(xiàn)差異的肽段，分別表現(xiàn)為肽段的上調(diào)和下調(diào)，其中以下調(diào)的肽段居多。故在肽段分析的基礎(chǔ)上進(jìn)一步行兩組淚液的蛋白質(zhì)譜分析。通過(guò)總蛋白定量，發(fā)現(xiàn)病例組淚液的蛋白質(zhì)定量明顯降低，行凝膠電泳，切取有顯著差異的條帶

4、，進(jìn)行蛋白分析，主要表現(xiàn)病例組血清白蛋白和免疫球蛋白κ鏈C區(qū)的明顯降低和補(bǔ)體C3幾乎完全缺失。
　　結(jié)論：結(jié)果表明，氧化應(yīng)激通過(guò)主要影響眼眶成纖維細(xì)胞的氧化還原狀態(tài)，在TAO的發(fā)病機(jī)制中起著至關(guān)重要的作用。內(nèi)源性的HSA作為主要的細(xì)胞外分子負(fù)責(zé)維持等離子體的氧化還原狀態(tài)。我們的實(shí)驗(yàn)中發(fā)現(xiàn)淚液血漿白蛋白的減少，一方面直接降低了細(xì)胞外的抗氧化防御系統(tǒng)，降低促氧化劑的可用性或被優(yōu)先氧化；另一方面提示氧化應(yīng)激反應(yīng)嚴(yán)重到足以耗盡組織的抗氧化

5、劑，并導(dǎo)致組織氧化損傷。從而導(dǎo)致TAO局部的抗氧化功能降低，促進(jìn)局部的氧化應(yīng)激反應(yīng)，加速炎癥的進(jìn)展。補(bǔ)體C3是三條補(bǔ)體激活途徑的重要組成部分，它具有直接或通過(guò)抗原遞呈細(xì)胞間接來(lái)調(diào)節(jié)CD4+的T細(xì)胞；通過(guò)延遲吞噬體的成熟和延長(zhǎng)凋亡體的封閉時(shí)間，從而有利于肽載入MHCⅡ類分子；有助于提高M(jìn)HC限制性（T細(xì)胞）對(duì)凋亡細(xì)胞的抗原的免疫應(yīng)答等功能。正因?yàn)镃3的這些功能，C3的缺乏將會(huì)導(dǎo)致CD4+T細(xì)胞的啟動(dòng)受損，導(dǎo)致抗原特異性T細(xì)胞增殖，降低T細(xì)