三維串聯(lián)液質聯(lián)用蛋白質組學分離方法的建立.pdf

1、在蛋白質組學研究中，對蛋白質或肽段混合樣品的充分分離是提高蛋白鑒定靈敏度的關鍵。多維液相色譜（multi-dimensional liquid chromatography, MDLC）分離技術結合了各種不同原理的色譜分離類型，極大地提高了分離系統(tǒng)的峰容量，能滿足高效、高可重現(xiàn)、高自動化分離復雜蛋白質組學樣品的要求。應用最為廣泛的多維液相色譜分離技術是由離子交換色譜（ion-exchange chromatography, IEC）和反

2、相色譜（reversed-phase chromatography,vRPC）串聯(lián)的二維液相色譜分離方法。近年來，由于蛋白質組學樣品鑒定深度要求的不斷提高，在二維液相色譜分離方法的基礎上，通過對樣品進行預分離的方式發(fā)展出了分離能力更強的三維液相色譜分離方法，并且已經展現(xiàn)出了有效簡化復雜樣品的潛力。
　　本文在傳統(tǒng)的二維液相色譜-質譜聯(lián)用方法的基礎上，分別采用肽段水平樣品預分離和蛋白水平樣品預分離，建立了兩種三維液相色譜-質譜聯(lián)用分

3、析方法。小鼠乳腺癌細胞系4T1細胞裂解液作為復雜蛋白質組學樣品的實例，在其中進行了分離和檢測。在基于肽段預分離的三維液相色譜分離系統(tǒng)下，鑒定到的蛋白數(shù)目是傳統(tǒng)二維液相色譜分離系統(tǒng)中鑒定到的2倍，表明分離系統(tǒng)維度的提高使復雜樣品進一步簡化，有助于蛋白鑒定能力的提高；而在基于蛋白預分離的三維液相色譜分離系統(tǒng)下，蛋白鑒定的效率更高，鑒定到的蛋白數(shù)目是傳統(tǒng)二維液相色譜分離系統(tǒng)中鑒定到的2.4倍，并且高豐度蛋白的富集程度更高，表明在蛋白水平進行樣