委陵菜黃酮對(duì)照品制備及含量測(cè)定方法的研究.pdf

1、中藥委陵菜為薔薇科（Rosaceae）植物委陵菜（Potentilla chinensis Ser.）的干燥全草，《中國(guó)藥典》2000，2005年版收載，其性寒，味苦，具有清熱解毒、涼血止痢的作用，常用于赤痢腹痛、久痢不止、痔瘡出血、癰腫瘡毒等。經(jīng)臨床應(yīng)用調(diào)查，天津薊縣中醫(yī)醫(yī)院和天津中醫(yī)藥大學(xué)附屬醫(yī)院應(yīng)用委陵菜治療糖尿病，取得了較好的療效。本課題組前期研究表明委陵菜降血糖作用的主要成分為委陵菜黃酮（trans-tiliroside），其

2、降血糖作用強(qiáng)于鹽酸苯乙雙胍，且毒性較低。該化合物與市售雙胍類、硫脲類、α-糖苷酶抑制劑、噻唑烷二酮類以及GLP-1R激動(dòng)劑肽類藥物在結(jié)構(gòu)上存在根本差異，則可能存在不同的作用機(jī)制，是具有較高開發(fā)價(jià)值的活性先導(dǎo)化合物。為進(jìn)一步的委陵菜藥材質(zhì)量控制以及藥物動(dòng)力學(xué)研究提供切實(shí)可行的分析方法，本文進(jìn)行委陵菜黃酮對(duì)照品的制備及含量分析方法學(xué)的研究。
　　 首先，利用高速逆流色譜技術(shù)分離制備委陵菜黃酮對(duì)照品，結(jié)合HPLC選擇溶劑體系以及調(diào)整各

3、溶劑的比例，將提取制備的委陵菜黃酮粗品用于HSCCC分離純化。結(jié)果表明，二氯甲烷-甲醇-水（體積比為5:4:2）為最佳溶劑體系，以上相為流動(dòng)相，下相為固定相，轉(zhuǎn)速為800r/min，流速為2.0mL/min，分離得到純度達(dá)98％的委陵菜黃酮。
　　 本文第二部分進(jìn)行委陵菜黃酮在藥材和生物樣品中含量分析方法研究。首先，利用高效液相色譜法建立委陵菜藥材中委陵菜黃酮的含量方法，通過(guò)考察不同比例的甲醇-醋酸液、乙腈-醋酸液色譜條件對(duì)委陵

4、菜黃酮與干擾物分離效果和峰形對(duì)稱性的影響，確定采用甲醇-3‰醋酸（49:51）為流動(dòng)相。通過(guò)測(cè)定不同生長(zhǎng)期和不同生長(zhǎng)部位委陵菜藥材中委陵菜黃酮的含量變化，結(jié)果表明7月份采集的委陵菜及其葉中委陵菜黃酮的含量最高，分別為1.018‰和1.477‰。
　　 其次，建立了高效液相色譜測(cè)定大鼠血漿樣品中委陵菜黃酮的含量，流動(dòng)相乙腈-3‰醋酸液（35:65）對(duì)委陵菜黃酮與血漿中內(nèi)源性物質(zhì)的分離效果較好，結(jié)果表明該方法準(zhǔn)確、快速、靈敏、專屬性

5、強(qiáng)。在此基礎(chǔ)上進(jìn)一步開展了委陵菜黃酮血漿蛋白結(jié)合率的研究，分別考察了平衡透析法和超濾法，由于委陵菜黃酮在磷酸鹽緩沖液中溶解度較低，穩(wěn)定性較差，且平衡透析所需時(shí)間較長(zhǎng)（1～2天），而超濾法在30min之內(nèi)能快速分離游離委陵菜黃酮，因此選用超濾法進(jìn)行委陵菜黃酮與大鼠血漿蛋白結(jié)合實(shí)驗(yàn)，測(cè)得委陵菜黃酮血漿蛋白結(jié)合率平均為87.95％。
　　 最后建立了大鼠組織樣品中委陵菜黃酮的含量測(cè)定方法，流動(dòng)相乙腈-3‰醋酸液（28:72）能實(shí)現(xiàn)委陵