非酒精性脂肪肝發(fā)病機(jī)理探討.pdf

1、第一部分 CAPON在非酒精性脂肪肝發(fā)病中的影響
　　目的：探討CAPON基因多態(tài)性對肝臟基因表達(dá)的影響作用，通過對差異基因的分析，探索CAPON在非酒精性脂肪肝發(fā)病的作用。
　　方法：Western Blot檢測人肝臟及其他組織CAPON表達(dá)。病理學(xué)方法診斷脂肪肝。肝臟全基因表達(dá)篩查采用Affymetrix公司Human Genome4302.0表達(dá)譜芯片進(jìn)行檢測，結(jié)果進(jìn)行SAM檢驗及功能分析（gene ontology分

2、析和pathway分析），篩選2組間的差異基因。差異基因采用Real time PCR驗證。
　　結(jié)果：Western Blot結(jié)果顯示CAPON在人肝臟中高度表達(dá)。CAPON rs12742393位點C攜帶組（n=26）脂肪肝患病比率（69.2%）高于AA攜帶組（n=60）患病比率（40%），結(jié)果具有統(tǒng)計學(xué)意義（P=0.009）。10例人肝臟標(biāo)本（5例CAPON rs12742393位點AA等位基因攜帶者，5例C攜帶者），其全基

3、因組差異表達(dá)檢測結(jié)果顯示共得到164個基因在SAM檢驗中P<0.05及差異倍數(shù)（C攜帶組/AA攜帶組）>1.4或小于0.7?；蚋患治觯╣ene ontology，GO）顯示48.8%差異基因參與生物學(xué)過程，其中60%參與代謝過程。Kegg通路分析顯示谷胱甘肽代謝通路顯著下調(diào)，丙酮酸代謝通路上調(diào)。Real time PCR驗證結(jié)果顯示谷胱甘肽代謝通路關(guān)鍵基因GSTM1以及其他抗氧化基因HBA1與HBB在C攜帶組中表達(dá)顯著下調(diào)。參與丙

4、酮酸代謝相關(guān)基因（PC及PDK4）則上調(diào)。
　　結(jié)論：CAPON在人肝臟中表達(dá)，并參與NAFLD的發(fā)生。CAPON rs12742393位點SNP與肝臟參與抗氧基因表達(dá)下降及參與糖異生通路基因表達(dá)上調(diào)相關(guān)。這可能是CAPON rs12742393位點SNP與NAFLD相關(guān)的可能分子基礎(chǔ)。
　　第二部分早期單純性脂肪肝基因組學(xué)改變
　　目的：檢測輕微脂肪肝患者全基因組表達(dá)，探索早期非酒精性脂肪肝（NAFLD）相關(guān)基因的改

5、變。
　　方法：肝外科收集肝臟良性疾病的手術(shù)標(biāo)本，肝細(xì)胞脂肪變性少于5%作為正常對照組，肝細(xì)胞脂肪變性15-25%（輕微脂肪肝）作為脂肪肝組。對照組（n=4）與脂肪肝組（n=4）進(jìn)行基因芯片檢測，差異基因進(jìn)行生物學(xué)分析及實時熒光定量PCR驗證。
　　結(jié)果：在P<0.05及差異倍數(shù)（脂肪肝組/對照組）大于1.4或小于0.7時，得到162條探針，代表128個差異基因?；蚋患治鲲@示53個基因參與代謝過程。Kegg通路顯示脂肪

6、肝組肝臟甘油三酯合成關(guān)鍵酶1?；视?磷酸O?；D(zhuǎn)移酶2（AGPAT2）、甘油激酶（GK）及脂肪酸攝取膜蛋白CD36表達(dá)上調(diào)，而脂肪酸從頭合成通路關(guān)鍵酶乙酰COA酶羧化酶（ACACA）、脂肪酸合成酶（FASN）及脂肪酸延長酶（ELOVL6）表達(dá)下調(diào)。調(diào)控因子——FGF21及C1orf85在脂肪肝組顯著上調(diào)。脂肪酸β氧化及VLDL分泌通路均無改變。
　　結(jié)論：單純性脂肪肝早期時，脂肪攝取及甘油三酯合成基因上調(diào)，但脂肪酸從頭合成基因下