青蒿RTNs的研究和虎仗葉的解剖結(jié)構(gòu)研究.pdf

1、1青蒿的RTNs研究
　　1.1從青蒿的EST數(shù)據(jù)庫(kù)中挖掘RTNs序列
　　青蒿為菊科植物黃花蒿（Artemisia annua L.）的干燥地上部分，其主要藥用成分青蒿素為抗瘧要藥。由于其重要的藥用價(jià)值，青蒿成為藥用植物中基因數(shù)據(jù)最為豐富的物種，截止2010年4月，在GenBank中，EST序列有9萬4千余個(gè)。從EST數(shù)據(jù)庫(kù)中挖掘RTNs序列，對(duì)研究青蒿不同組織中的同源基因，認(rèn)識(shí)其復(fù)雜的生理和病理過程，分析種內(nèi)遺傳變異以及

2、物種進(jìn)化關(guān)系具有重要的作用。本研究利用CAP3聚類及Bioperl輔助分析，對(duì)青蒿的EST數(shù)據(jù)集進(jìn)行挖掘，篩選出確認(rèn)為RTNs的青蒿EST contig22個(gè)，選擇其中長(zhǎng)度大于900bp的contig1個(gè)，設(shè)計(jì)1對(duì)PCR引物，通過常規(guī)的PCR驗(yàn)證，得到與預(yù)期序列長(zhǎng)度一致的青蒿反轉(zhuǎn)錄轉(zhuǎn)座子的核苷酸序列，說明預(yù)測(cè)的序列存在于青蒿基因組中，該數(shù)據(jù)挖掘方案切實(shí)可行，為青蒿RTNS的數(shù)據(jù)挖掘提供了新的思路。
　　1.2青蒿iPBS的條件優(yōu)化

3、
　　iPBS(inter-Primer binding site)是2010年出現(xiàn)的一種新的分子標(biāo)記方法，運(yùn)用iPBS技術(shù)可以在沒有已知序列信息的條件下進(jìn)行，具有適應(yīng)性強(qiáng)，操作簡(jiǎn)單，分辨率高等優(yōu)點(diǎn)。iPBS標(biāo)記是基于PCR的標(biāo)記，其反應(yīng)條件易受各種因素的干擾，為確保iPBS分析結(jié)果的可靠性和重復(fù)性，本文通過對(duì)PCR反應(yīng)體系中的模板DNA、Taq DNA聚合酶、dNTP以及Mg2+濃度等最佳反應(yīng)條件進(jìn)行探索，建立了適用于青蒿的優(yōu)化

4、的iPBS-PCR的反應(yīng)體系。該分子標(biāo)記體系的建立為iPBS標(biāo)記在青蒿分子標(biāo)記輔助育種、遺傳多樣性、種質(zhì)資源鑒定等領(lǐng)域提供研究基礎(chǔ)。
　　2虎杖葉的解剖結(jié)構(gòu)研究
　　虎杖葉具有平肝潛陽、祛痰息風(fēng)的功效;性苦，微澀，微寒，歸肝經(jīng)。但虎杖葉并沒有作為常規(guī)中醫(yī)用藥來發(fā)揮其療效，為了節(jié)約藥用植物資源，本研究對(duì)虎杖葉的解剖結(jié)構(gòu)進(jìn)行研究，為開發(fā)出虎杖植株新的藥用部位提供部分依據(jù)。本研究運(yùn)用生物顯微技術(shù)，對(duì)虎杖葉進(jìn)行石蠟切片，通過徒手撕片

5、及粉末制片，其結(jié)果為:虎杖的上表皮細(xì)胞排列規(guī)則，近等徑，虎杖的下表皮細(xì)胞排列不及上表皮整齊，氣孔僅分布在下表皮，氣孔類型為不定式。橫切面觀，虎杖葉的上下表皮均由一層細(xì)胞組成，上表皮細(xì)胞較大，近長(zhǎng)方形，厚度為66.3μm，下表皮細(xì)胞較小，近方形，其厚度為38μm。葉肉中，柵欄組織緊接表皮下方，排成一層，而海綿組織為于柵欄組織與下表皮之間，是典型的兩面葉，柵欄組織細(xì)胞呈圓柱形，排列整齊緊密，其中最長(zhǎng)的達(dá)到95μm，寬為28.5μm，最短的達(dá)