乳腺浸潤(rùn)性乳頭狀癌的臨床病理特征研究及Nek2C與乳腺癌的初步研究.pdf

1、第一部分
　　目的:
　　探討乳腺浸潤(rùn)性乳頭狀癌的臨床病理特征及分子免疫表型，分析浸潤(rùn)性導(dǎo)管癌與浸潤(rùn)性乳頭狀癌的無(wú)瘤生存及總生存以及乳頭狀癌的四種分子亞型的預(yù)后情況。
　　方法:
　　選取2000年1月至2011年5月共284例浸潤(rùn)性乳頭狀癌病例。從同期的13428例浸潤(rùn)性導(dǎo)管癌病例中隨機(jī)選取300例。對(duì)選取的2003年之前的所有病例做常規(guī)Her2免疫組化染色。比較浸潤(rùn)性乳頭狀癌和浸潤(rùn)性導(dǎo)管癌的臨床病理特征及預(yù)后

2、情況。同時(shí)COX多因素分析浸潤(rùn)性乳頭狀癌的無(wú)瘤生存及總生存情況，對(duì)11例死亡病例探討其浸潤(rùn)類(lèi)型、復(fù)發(fā)部位、復(fù)發(fā)時(shí)間、復(fù)發(fā)腫瘤分級(jí)、轉(zhuǎn)移時(shí)間及死亡時(shí)間。同時(shí)評(píng)估浸潤(rùn)性乳頭狀癌4種分子亞型的臨床病理特征及無(wú)瘤生存和總生存。
　　結(jié)果:
　　浸潤(rùn)性乳頭狀癌與浸潤(rùn)性導(dǎo)管癌相比，在年齡、腫瘤分級(jí)、淋巴結(jié)狀態(tài)、絕經(jīng)狀態(tài)方面有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。在腫瘤大小、家族史、放療、化療、內(nèi)分泌治療、分子分型方面，兩者比較無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P>0

3、.05)。浸潤(rùn)性乳頭狀癌的5年總生存率(92.77％vs87.95％)及無(wú)瘤生存率(87.95％vs80.72％)均高于浸潤(rùn)性導(dǎo)管癌。在11例死亡的浸潤(rùn)性乳頭狀癌中，有4例是純型的，7例混合有其它浸潤(rùn)成分，如浸潤(rùn)性導(dǎo)管癌、浸潤(rùn)性小葉癌、浸潤(rùn)性微乳頭狀癌。在浸潤(rùn)性乳頭狀癌的4個(gè)分子亞型中，luminalA，luminalB，Her2及三陰型分別占51.06％、17.25％、13.03％、18.66％，其5年總生存率分別為97.78％，92

4、.31％，81.82％，85.71％，5年無(wú)瘤生存率分別為95.56％，84.62％，72.73％，78.57％。luminalA型5年總生存率和無(wú)瘤生存率均高于其它亞型。
　　結(jié)論:
　　與浸潤(rùn)性導(dǎo)管癌相比，浸潤(rùn)性乳頭狀癌的預(yù)后較好，其5年無(wú)瘤生存率及總生存率均高于浸潤(rùn)性導(dǎo)管癌。浸潤(rùn)性乳頭狀癌的復(fù)發(fā)腫瘤多為中、高分級(jí)，且純型的病例死亡率與混合型相比較低。在浸潤(rùn)性乳頭狀癌的4個(gè)亞型中，luminaA型占51.06％，其5年總

5、生存率和無(wú)瘤生存率均高于其它亞型，預(yù)后相對(duì)最好。
　　目的:
　　為探討NIMA相關(guān)激酶2(NIMA-relatedkinase2，Nek2)的剪接異構(gòu)體Nek2C在乳腺上皮惡性轉(zhuǎn)化中的作用，本實(shí)驗(yàn)在結(jié)合前期研究成果的基礎(chǔ)上，進(jìn)一步探討乳腺癌發(fā)生發(fā)展模式的不同階段Nek2C的表達(dá)水平，分析其在乳腺癌生長(zhǎng)、侵襲中的作用及與乳腺癌發(fā)生發(fā)展的關(guān)系，為乳腺癌的診斷、治療等提供新的理論基礎(chǔ)和實(shí)驗(yàn)依據(jù)。
　　方法:
　　以國(guó)

6、內(nèi)外相關(guān)研究為依據(jù)，在前期的研究基礎(chǔ)上，用乳腺普通增生細(xì)胞系MCF10A，不典型增生細(xì)胞系MCF10AT，導(dǎo)管內(nèi)癌細(xì)胞系MCF10DCIS.com和浸潤(rùn)性導(dǎo)管癌細(xì)胞系MCF10Cal四個(gè)細(xì)胞系建立乳腺癌的多階段發(fā)生發(fā)展模型。采用RNA干擾技術(shù)對(duì)內(nèi)源性Nek2C表達(dá)高的細(xì)胞系MCF10DCIS.com和MCF10Cal進(jìn)行干擾，同時(shí)將Nek2C質(zhì)粒轉(zhuǎn)染進(jìn)內(nèi)源性Nek2C表達(dá)低的細(xì)胞系MCF10A和MCF10AT。PCR和westernbl

7、ot分別檢測(cè)其mRNA和蛋白質(zhì)表達(dá)水平，同時(shí)對(duì)其生長(zhǎng)能力，浸潤(rùn)及遷移進(jìn)行檢測(cè)。選取不同階段的乳腺組織采用PCR技術(shù)檢測(cè)其N(xiāo)ek2C的mRNA表達(dá)水平。
　　結(jié)果:
　　1.Nek2C質(zhì)粒轉(zhuǎn)染后的MCF10A和MCF10AT細(xì)胞分別采用westernblot和半定量PCR檢測(cè)Nek2C表達(dá)水平，結(jié)果顯示，與陰性對(duì)照組相比，Nek2C質(zhì)粒轉(zhuǎn)染后的細(xì)胞其N(xiāo)ek2C的mRNA和蛋白水平均表達(dá)上調(diào)，而且細(xì)胞生長(zhǎng)活躍。
　　2.合

8、成特異的siRNA寡核苷酸，采用RNA干擾技術(shù)沉默Nek2C表達(dá)高的細(xì)胞系MCF10DCIS.com和MCF10Cal，半定量PCR驗(yàn)證顯示Nek2CmRNA表達(dá)缺失，與陰性對(duì)照組相比轉(zhuǎn)染后的細(xì)胞其生長(zhǎng)、浸潤(rùn)及遷移能力均明顯減弱，細(xì)胞的惡性程度降低。
　　3.在乳腺組織(正常乳腺組織、不典型增生乳腺組織、導(dǎo)管內(nèi)癌及浸潤(rùn)性癌)中驗(yàn)證Nek2C的mRNA表達(dá)水平，PCR結(jié)果顯示導(dǎo)管內(nèi)癌和浸潤(rùn)性癌中的Nek2C表達(dá)水平明顯高于正常組織和

9、不典型增生。在浸潤(rùn)性癌組織中，高分級(jí)的癌組織中Nek2C高于低分級(jí)的癌組織。
　　結(jié)論:
　　1.在乳腺癌發(fā)生發(fā)展過(guò)程中(正常乳腺上皮細(xì)胞→導(dǎo)管上皮不典型增生→導(dǎo)管原位癌→浸潤(rùn)性癌)Nek2C的表達(dá)水平表現(xiàn)為逐步增加的趨勢(shì)，提示Nek2C可能參與了乳腺組織的惡性轉(zhuǎn)化。
　　2.Nek2C在乳腺癌的發(fā)生發(fā)展過(guò)程中起著重要的作用，在細(xì)胞水平，上調(diào)內(nèi)源性Nek2C表達(dá)水平低的細(xì)胞系中的Nek2C水平，其細(xì)胞惡性程度增強(qiáng)，下調(diào)