巴曲酶玻璃體腔應(yīng)用的實驗研究.pdf

1、山東省醫(yī)學科學院碩士學位論文巴曲酶玻璃體腔應(yīng)用的實驗研究姓名：孫曉蕾申請學位級別：碩士專業(yè)：眼科學指導教師：董曉光20080501山東省醫(yī)學科學院碩士學位論文待細胞貼壁后以上述培養(yǎng)液置換含血清的培養(yǎng)液，繼續(xù)培養(yǎng)24h，MTT處理后測定492nm波長處的吸光度(opticaldensity，OD)值。3流式細胞術(shù)檢測巴曲酶對RPE增殖活性的影響RPE細胞懸液中加入羧基熒光素二醋酸鹽琥珀酰亞胺酯(5or6(NSuccinimidyloxyc

2、arbonyD一3’，6’O，O’一diacetylfluore∞ein，CFSE)作用10min，繼續(xù)培養(yǎng)至細胞貼壁后以含不同濃度巴曲酶的培養(yǎng)基(1／100、1／32、1／16、1／10KUmL“1)的置換原培養(yǎng)液，繼續(xù)培養(yǎng)24h后使用流式細胞儀檢測CFSE的熒光強度。二、玻璃體腔灌注巴曲酶對兔眼內(nèi)組織的影響選取健康成年的新西蘭大白兔24只，隨機分為3組，每組8只，均以右眼為實驗眼行經(jīng)扁平部玻璃體切除術(shù)，術(shù)中應(yīng)用含不同濃度巴曲酶的平衡

3、鹽溶液進行玻璃體腔灌注。其中A組(對照組)使用不含巴曲酶的無菌平衡鹽溶液(balancedsaltsolution，BSS)；B組(低濃度組)使用巴曲酶濃度為1／100KUmL1的BSS；C組(高濃度組)使用巴曲酶濃度為1／10KUmL“1的BSS。術(shù)后通過以下指標檢測灌注液中添加的巴曲酶對視網(wǎng)膜組織的影響。1眼部一般體征的檢查：術(shù)前、術(shù)后1d、3d、1w、4w以裂隙燈顯微鏡及雙目間接檢眼鏡對各組動物行眼部一般體征檢查。術(shù)前及術(shù)后ld、

4、1w、4w以TonoPen測量各組動物眼壓，觀察眼壓變化。2組織病理學檢查：術(shù)后3d及4w，每組動物中隨機各選取2只處死，眼球取材后經(jīng)固定、脫水、透明、包埋、切片后，行蘇木素伊紅染色。隨機選取切片，觀察視網(wǎng)膜形態(tài)改變。3透射電子顯微鏡檢查：術(shù)后3d及4w，每組動物中隨機各選取2只處死，眼球取材后經(jīng)固定、脫水、浸透、包埋、半薄切片染色定位后，制作110nto超薄切片，醋酸雙氧鈾和枸櫞酸鉛雙重染色后，透射電子顯微鏡下觀察視網(wǎng)膜超微結(jié)構(gòu)的改變