丙型病毒性肝炎母嬰傳播分子機(jī)制研究—人胎盤(pán)滋養(yǎng)層細(xì)胞CLEC4L定位及其與丙型肝炎病毒感染相關(guān)性.pdf

1、導(dǎo)致丙型病毒性肝炎的致病因子是丙型肝炎病毒（hepatitisCvirus,HCV）。據(jù)世界衛(wèi)生組織最新數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)，全世界估計(jì)約1億8千萬(wàn)人感染HCV。HCV感染的一個(gè)重要特征就是易致慢性化。但到目前為止，丙肝的預(yù)防仍無(wú)有效的方法。HCV在我國(guó)主要經(jīng)血液或血制品傳播，但近年來(lái)加強(qiáng)對(duì)獻(xiàn)血員進(jìn)行HCV篩檢使輸血后感染HCV大為降低。現(xiàn)已證實(shí)HCV存在母嬰傳播（mother-to-infanttransmission,MIT），因而HCV母嬰傳

2、播已成為研究熱點(diǎn)，但其具體傳播分子機(jī)制目前尚不十分清楚。
　　滋養(yǎng)層細(xì)胞是胎盤(pán)屏障的第一層細(xì)胞，HCV經(jīng)胎盤(pán)感染胎兒必須突破此細(xì)胞層。已有研究發(fā)現(xiàn)HCV病毒包膜糖蛋白E1/E2結(jié)合靶細(xì)胞表面受體后，病毒與靶細(xì)胞膜融合，引起靶細(xì)胞感染。母嬰傳播中HCV如何與靶細(xì)胞上受體結(jié)合的具體機(jī)制仍不清楚。因此深入研究HCV的受體及相關(guān)輔受體，對(duì)了解HCV致病機(jī)制至關(guān)重要。
　　研究表明，樹(shù)突狀細(xì)胞（dendriticcell，DC）作為H

3、CV轉(zhuǎn)染細(xì)胞之一，其表面的樹(shù)突狀細(xì)胞特異性細(xì)胞間粘附分子-3結(jié)合非整合素因子即CLEC4L可與HCV的包膜糖蛋白E1/E2結(jié)合，介導(dǎo)病毒內(nèi)化，感染靶細(xì)胞。在HCV母嬰傳播過(guò)程中是否也具有與以上病毒相似的分子機(jī)制，目前尚不完全清楚。
　　為探討在母嬰傳播中HCV如何與人滋養(yǎng)層細(xì)胞相互作用本研究進(jìn)行了如下工作：
　　1、通過(guò)改良后的分離純化法獲得純度較高的滋養(yǎng)層細(xì)胞，應(yīng)用HCVRNA陽(yáng)性血清進(jìn)行體外感染，通過(guò)細(xì)胞裂解液裂解感染后

4、細(xì)胞，經(jīng)熒光RT-PCR技術(shù)檢測(cè)感染后細(xì)胞培養(yǎng)上清和細(xì)胞內(nèi)的HCVRNA，以觀察HCV的感染及復(fù)制情況。經(jīng)免疫熒光染色感染后48h滋養(yǎng)層細(xì)胞細(xì)胞漿中可見(jiàn)HCVNS5表達(dá)，分別于感染后24、48、72、96、120h收集的培養(yǎng)上清和感染后細(xì)胞內(nèi)均可以檢測(cè)到HCVRNA。HCVRNA陽(yáng)性血清能在體外感染原代培養(yǎng)的人滋養(yǎng)層細(xì)胞，且HCV可在滋養(yǎng)層細(xì)胞中復(fù)制，為HCV母嬰傳播途徑提供了形態(tài)學(xué)支持。
　　2、免疫組化染色、免疫熒光方法觀察C

5、LEC4L在不同孕期胎盤(pán)絨毛組織及人滋養(yǎng)層細(xì)胞的定位與分布，為進(jìn)一步研究母嬰傳播分子機(jī)制提供細(xì)胞形態(tài)學(xué)基礎(chǔ)。
　　3、設(shè)CLEC4L單抗組、甘露聚糖組和對(duì)照組研究CLEC4L介導(dǎo)HCV感染人胎盤(pán)滋養(yǎng)層細(xì)胞的情況。經(jīng)RT-PCR法檢測(cè)HCV感染后細(xì)胞內(nèi)HCVRNA含量，結(jié)果顯示CLEL4L單抗組細(xì)胞內(nèi)HCVRNA水平較低，甘露聚糖組顯示類(lèi)似結(jié)果。可見(jiàn)CLEC4L能夠介導(dǎo)HCV進(jìn)入人胎盤(pán)滋養(yǎng)層細(xì)胞，CLEC4L單抗和甘露聚糖對(duì)HCV與