催產(chǎn)素對(duì)大鼠切割疼痛痛覺調(diào)制的作用及機(jī)制.pdf

1、目的
　　觀察大鼠后足切割后中樞神經(jīng)系統(tǒng)內(nèi)催產(chǎn)素的變化規(guī)律,腹腔、鞘內(nèi)和側(cè)腦室內(nèi)給予外源性催產(chǎn)素對(duì)大鼠后足切割痛的痛覺調(diào)制作用,并用催產(chǎn)素受體阻斷劑atosiban和阿片類受體阻斷劑納洛酮預(yù)先阻斷相應(yīng)受體,研究中樞內(nèi)催產(chǎn)素痛覺調(diào)制作用與這兩種受體間的關(guān)系,探討其簡(jiǎn)單作用機(jī)制。
　　方法
　　1.雄性SD大鼠隨機(jī)分為切割痛組和空白對(duì)照組,切割痛組按照Brennan1996年介紹的方法建立大鼠后足切割痛模型,空白對(duì)照組不做

2、任何處理。切割痛組大鼠在切割后的30min、1h、3h、6h和24h取脊髓腰膨大和腦進(jìn)行免疫熒光檢測(cè)OT、OTR陽(yáng)性細(xì)胞表達(dá),取背角和PVN行Western-blot以及RT-PCR測(cè)定,檢測(cè)OT、OTR轉(zhuǎn)錄和蛋白表達(dá)變化。
　　2.雄性SD大鼠隨機(jī)分為3組:腹腔注射組、鞘內(nèi)注射組、側(cè)腦室注射組;腹腔注射組分為100μl生理鹽水、0.5nmol、1nmol和2.5nmol四個(gè)劑量組,鞘內(nèi)注射組和側(cè)腦室注射組分為10μl(5μl)生

3、理鹽水、0.05nmol、0.1 nmol和0.25nmol四個(gè)劑量組。腹腔注射組大鼠在注射后的30min、1h、3h、6h、12h、24h,鞘內(nèi)和側(cè)腦室內(nèi)注射大鼠在注射后的10min、30min、1h、3h、6h、12h、24h進(jìn)行機(jī)械性痛閾測(cè)定。
　　3.雄性SD大鼠隨機(jī)分為2大組:鞘內(nèi)注射組、側(cè)腦室注射組。每個(gè)大組又分為如下小組:①生理鹽水+OT0.05nmol組;②生理鹽水+OT0.1nmol組;③生理鹽水+OT0.25n

4、mol組;④atosiban1.0nmol+OT0.05nmol組;⑤atosiban1.0nmol+OT0.1 nmol組;⑥atosiban1.0nmol+OT0.25nmol組;⑦納洛酮0.5μg+OT0.05nmol組;⑧納洛酮0.5μg+OT0.1nmol組;⑨納洛酮0.5μg+OT0.25nmol組。各組大鼠在切割給藥后的10min、30min、1h、3h、6h、12h、24h進(jìn)行機(jī)械性痛閾測(cè)定,檢測(cè)其變化情況。
　　

5、結(jié)果
　　1.切割痛大鼠與空白對(duì)照組大鼠相比,在切割后的30min開始持續(xù)至至少6h PVN內(nèi)的OT陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)量明顯下降,WB顯示在該時(shí)間段內(nèi)PVN內(nèi)的OT蛋白總量明顯下降,而m RNA卻在切割后的30min至1h內(nèi)升高;脊髓腰膨大背角Ⅰ、Ⅱ板層內(nèi)OT陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)和蛋白表達(dá)量在切割后的30min至6h開始上升,而RT-PCR顯示在脊髓腰膨大處無(wú)OT m RNA出現(xiàn);無(wú)論切割前后PVN內(nèi)均未見OTR的表達(dá),而脊髓腰膨大背角Ⅰ、Ⅱ板層內(nèi)

6、OTR在切割后30min至至少12h表達(dá)上升。
　　2.腹腔注射0.5nmol、1nmol或2.5nmolOT對(duì)大鼠切割痛足機(jī)械痛閾無(wú)影響;側(cè)腦室內(nèi)注射0.05nmol、0.1nmol或0.25nmolOT對(duì)大鼠切割痛足機(jī)械痛閾有劑量依賴性地提高,其持續(xù)時(shí)間從給藥后10min至6h;鞘內(nèi)給藥同樣會(huì)使切割痛大鼠產(chǎn)生劑量依賴性機(jī)械痛閾增強(qiáng);側(cè)腦室和鞘內(nèi)注射OT對(duì)切割痛的鎮(zhèn)痛作用均有封項(xiàng)作用。
　　3.鞘內(nèi)和側(cè)腦室內(nèi)預(yù)注射atos

7、iban都可以阻斷OT對(duì)切割痛的鎮(zhèn)痛作用,且增加OT劑量并不能逆轉(zhuǎn)該效應(yīng);而鞘內(nèi)和側(cè)腦室內(nèi)預(yù)注射納洛酮可以部分阻斷OT的鎮(zhèn)痛作用,OT劑量增加時(shí)該阻斷作用減弱,在OT劑量達(dá)到0.25nmol時(shí)其鎮(zhèn)痛作用再次出現(xiàn)。
　　結(jié)論
　　1.切割痛大鼠PVN內(nèi)OT轉(zhuǎn)錄增加而蛋白表達(dá)減少,脊髓內(nèi)OT雖無(wú)轉(zhuǎn)錄但蛋白表達(dá)增加,表明切割后PVN內(nèi)合成的OT轉(zhuǎn)運(yùn)至脊髓和(或)其他位置發(fā)揮痛覺調(diào)制作用。
　　2.無(wú)論切割與否大鼠PVN內(nèi)OT