在EAE模型中及用血吸蟲(chóng)卵抗原干預(yù)后γδT細(xì)胞作用機(jī)制的研究.pdf

1、目的:1.在發(fā)病時(shí)間、疾病嚴(yán)重程度、病理變化和病程特點(diǎn)方面比較蛋白脂蛋白(proteolipid protein,PLP)肽段139-151(PLP<,138-151>)誘導(dǎo)的實(shí)驗(yàn)性自身免疫性腦脊髓炎(experimental autoimmune encephalomyelitis,EAE)模型與PLP<,178-191>誘導(dǎo)的EAE模型.2.研究PLP<,178-191>免疫后小鼠體內(nèi)γδT細(xì)胞比例的變化以及日本血吸蟲(chóng)蟲(chóng)卵抗原(sc

2、histosome egg antigens,SEA)干預(yù)對(duì)其的影響,探討γδT細(xì)胞與EAE發(fā)病過(guò)程的關(guān)系.3.研究PLP<,178-191>免疫后淋巴結(jié)內(nèi)活化的γδT細(xì)胞對(duì)細(xì)胞因子分泌情況的影響以及SEA干預(yù)后的改變.材料和方法:1.分別用PLP<,178-191>、PLP<,139-151>與完全福氏佐劑免疫雌性SJL/J小鼠,并且尾靜脈注射百日咳桿菌,誘發(fā)小鼠EAE模型,觀察臨床表現(xiàn)進(jìn)行行為學(xué)評(píng)分,用蘇木素-伊紅(hematoxy

3、lin and eosin,HE)和固蘭(Luxol Fast blue)髓鞘染色方法觀察腦和脊髓的病理學(xué)改變.2.用流式細(xì)胞儀檢測(cè)技術(shù)分別觀察正常對(duì)照組、PLP<,178-191>免疫組、SEA干預(yù)組三組小鼠腸上皮內(nèi)和淋巴結(jié)CD3陽(yáng)性細(xì)胞中γδT細(xì)胞百分比的變化.3.用γδT細(xì)胞受體(T cell receptor,TCR)固相抗體包被法刺激活化PLP<,178-191>免疫組和SEA干預(yù)組小鼠的淋巴結(jié)細(xì)胞(lymph nodes c

4、ells,LNC),采用酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)(enzyme linked immunosorbent assay,ELISA)的方法檢測(cè)培養(yǎng)48小時(shí)后空白對(duì)照孔、PLP<,178-191>刺激孔和PLP<,178-191>+SEA刺激孔中干擾素(interferon,IFN)-γ和白細(xì)胞介素(Interleukin,IL)-4的分泌情況.結(jié)論:1.與PLP<,139-151>相比,PLP<,178-191>誘發(fā)的EAE模型同樣具有發(fā)病率高的

5、特點(diǎn),病程上具有復(fù)發(fā)-緩解的趨勢(shì),而臨床和病理特點(diǎn)兩者都與MS較相似,這兩個(gè)肽段誘發(fā)的EAE模型都是研究MS比較理想的動(dòng)物模型.2.PLP<,178-191>免疫后早期小鼠iIEL和LNC中γδT細(xì)胞比例升高,它們很可能是EAE疾病早期病灶周?chē)忙腡細(xì)胞的最初來(lái)源,γδT細(xì)胞與EAE發(fā)病可能有著密切關(guān)系.SEA的干預(yù)能使這種升高幅度有一定程度的降低,這可能是SEA用于EAE治療研究的機(jī)制之一.3.PLP<,178-191>免疫使活化的γ