利用日本血吸蟲重組信號蛋白14-3-3檢測血吸蟲抗原及抗體的研究.pdf

1、目的:制備日本血吸蟲(中國大陸株)重組信號蛋白14-3-3(rSj14-3-3),并制備抗rSj14-3-3蛋白的單克隆抗體和多克隆抗體,探討純化的rSj14-3-3蛋白及其相應(yīng)的單克隆抗體和多克隆抗體對日本血吸蟲病的診斷價值。
　　方法:通過對含有重組質(zhì)粒pET28a-Sj14-3-3的工程菌E.coli BL21的誘導培養(yǎng),制備rSj14-3-3蛋白,以蛋白純化試劑盒(His-Bind Purification Kit)予以純

2、化,獲得高純度的rSj14-3-3蛋白,以純化后的rSj14-3-3蛋白為抗原免疫Balb/c小鼠,用雜交瘤技術(shù)制備抗rSj14-3-3蛋白的單克隆抗體并予以純化。通過間接ELISA方法測定單克隆抗體的效價,并用Western blotting鑒定單克隆抗體的特異性。同時,以純化后的rSj14-3-3蛋白為抗原免疫家兔,制備抗rSj14-3-3蛋白的抗血清并予以純化,制備相應(yīng)的多克隆抗體,用間接ELISA法測定多克隆抗體的效價。以純化的

3、rSj14-3-3抗原用間接ELISA法分別對30例急性血吸蟲病患者、30例慢性血吸蟲病患者和50例健康人血清中的特異性抗體進行檢測;用純化的抗rSj14-3-3多克隆抗體為捕捉系統(tǒng),以辣根過氧化物酶標記的單克隆抗體HRP-1D4為檢測系統(tǒng)的酶聯(lián)免疫吸附試驗檢測上述急、慢性血吸蟲病患者和健康人血清中的循環(huán)抗原。
　　結(jié)果:獲得了高純度的rSj14-3-3蛋白抗原;篩選出了能夠穩(wěn)定分泌抗rSj14-3-3單克隆抗體的雜交瘤細胞株1D

4、4,其單克隆抗體的亞型經(jīng)鑒定為IgG1,抗體的效價在107以上。通過間接ELISA法分別對30例急性血吸蟲病患者和30例慢性血吸蟲病患者血清中的特異性抗體進行檢測,陽性率分別為100％(30/30)和96.7％(29/30);雙抗夾心ELISA法分別對上述急、慢性血吸蟲病患者血清中的循環(huán)抗原進行檢測,陽性率分別為73.3％(22/30)和53.3％(16/30),這兩種方法對50例健康人血清進行檢測的陽性率均為0(0/50)。