日本血吸蟲(chóng)抗原T細(xì)胞表位的篩選與鑒定.pdf

1、該研究運(yùn)用生物信息學(xué)方法分析和預(yù)測(cè)日本血吸蟲(chóng)線粒體相關(guān)蛋白(Sj338)、22.6 kDa膜相關(guān)抗原(Sj22.6)、磷酸丙糖異構(gòu)酶(SjTPI)和97 kDa副肌球蛋白(Si97)的T細(xì)胞表位,設(shè)計(jì)并合成候選表位的編碼核苷酸,定向克隆入融合表達(dá)載體pET-32c(+),誘導(dǎo)表達(dá)硫氧還蛋白(Trx)融合蛋白.候選表位融合蛋白純化后體外刺激小鼠淋巴細(xì)胞,經(jīng)淋巴細(xì)胞增殖實(shí)驗(yàn)和細(xì)胞因子分泌實(shí)驗(yàn)鑒定出若干能誘導(dǎo)Th1型細(xì)胞因子產(chǎn)生的T細(xì)胞表位.

2、其中P4(來(lái)源于Sj22.6)、P18(來(lái)源于SjTPI)和P22(來(lái)源于Sj97)能夠誘導(dǎo)較強(qiáng)的淋巴細(xì)胞增殖和Th1型細(xì)胞因子產(chǎn)生.同時(shí)對(duì)此三個(gè)T細(xì)胞表位進(jìn)行了同源性分析,并進(jìn)一步對(duì)P4、P22的免疫原性及P18與自然感染血吸蟲(chóng)小鼠淋巴細(xì)胞的反應(yīng)性進(jìn)行了研究.第—部分:日本血吸蟲(chóng)抗原T細(xì)胞表位的預(yù)測(cè)、基因重組、表達(dá)及純化根據(jù)Sj22.6、Sj338、SjTPI和Sj97的氨基酸序列,用TEPITOPE、SYFPEITHI等計(jì)算機(jī)軟件預(yù)

3、測(cè)其T細(xì)胞表位,確定了候選表位14個(gè).第二部分日本血吸蟲(chóng)抗原T細(xì)胞表位的鑒定為鑒定血吸蟲(chóng)特異性的T細(xì)胞表位,首先以日本血吸蟲(chóng)照射尾蚴免疫C3H/HeJ及C57BL/6小鼠,5周后分別以rSi22.6、rSi338、rSiTPI和SWAP加不完全福氏佐劑(IFA)尾基部皮下注射加強(qiáng)免疫.7~10天后無(wú)菌取腹股溝淋巴結(jié)及脾臟,制備淋巴細(xì)胞懸液.用純化的候選表位融合蛋白與上述細(xì)胞共培養(yǎng),<'3>H-TdR摻入法檢測(cè)其增殖.結(jié)果顯示,候選表位融

4、合蛋白中大部分可刺激致敏淋巴細(xì)胞增殖而不能刺激小鼠幼稚淋巴細(xì)胞增殖,表明候選表位中大部分為日本血吸蟲(chóng)特異性T細(xì)胞袁位.總之,該研究運(yùn)用生物信息學(xué)結(jié)合淋巴細(xì)胞增殖及細(xì)胞因子分泌實(shí)驗(yàn),從Sj22.6、SjTPI、Sj97中鑒定出若干T細(xì)胞表位.我們采用的計(jì)算機(jī)預(yù)測(cè)與動(dòng)物實(shí)驗(yàn)相結(jié)合鑒定T細(xì)胞表位的策略,為國(guó)內(nèi)外首次將計(jì)算機(jī)預(yù)測(cè)表位的方法運(yùn)用于寄生蟲(chóng)學(xué)領(lǐng)域,具有方便、快速且花費(fèi)較低的優(yōu)點(diǎn).對(duì)重組肽和合成肽的動(dòng)物實(shí)驗(yàn)結(jié)果對(duì)比后發(fā)現(xiàn)表位肽與Trx融