Wnt10A mRNA在結直腸癌中的表達.pdf_第1頁
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文檔簡介

1、Wnt通路參與生物的發(fā)育和腫瘤的發(fā)生,近年來Wnt通路中一些成分在腫瘤發(fā)生過程中的作用已得到確認,特別是APC和β-catenin與腫瘤發(fā)生的關系已有大量的報道,但Wnt通路的上游成分Wnt和研究報道不多,本課題擬通過RT-PCR檢測結直腸澡中Wnt10A mRNA的表達情況,以了解Wnt基因在結直腸癌發(fā)生中的作用.30例新鮮結直腸癌標本,分別于距腫瘤邊緣5cm外及腫瘤處分別取1.0×0.3×0.3cm的組織塊,結直腸癌都經病理證實.按

2、照Trizol試劑盒的說明提取結直腸癌組織及正常組織中的總mRNA,用隨機引物Oligo dT按照試劑合成cDNA第一條鏈的要求合成cDNA,RT反應產物用作PCR的模板DNA.使用特異性引物進行PCR,條件是94℃預變性5分鐘,94℃變性40秒,60℃退火40秒;72℃延伸1min;循環(huán)參數35,72℃末次延伸7min.β-actin基因作為內對照.取10μ1 PCR產物在2﹪瓊脂凝膠電泳,紫外線燈下觀察電泳帶,凝膠成像分析系統(tǒng)掃描拍

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