桂花花瓣衰老過(guò)程中蛋白酶活性變化及其特性研究.pdf

1、桂花(Osmanthus fragrans)是我國(guó)十大名花之一,素以花香著稱。但是由于桂花花期短,凋謝快,因而對(duì)觀賞和經(jīng)濟(jì)價(jià)值有一定影響。本研究以柳葉金桂(Osmanthusfragrans‘Liuye Jingui’)為供試材料,從花瓣蛋白酶活性入手,研究了桂花花瓣衰老期間蛋白酶活性和種類的變化規(guī)律,建立了桂花花瓣蛋白酶活性底物膠電泳檢測(cè)體系。探討了蛋白酶抑制劑、蛋白酶促進(jìn)劑、6-BA、ABA對(duì)桂花衰老進(jìn)程及可溶性蛋白質(zhì)、游離氨基酸,

2、蛋白酶活性和種類等生理生化指標(biāo)變化的影響。從酶水平上探討桂花衰老的機(jī)理,為延緩桂花花瓣衰老提供理論基礎(chǔ)。
　　 主要研究結(jié)果如下:
　　 (1)桂花花瓣蛋白酶活性的最適溫度為37℃,最適pH為8。在花瓣中可以檢測(cè)到3種蛋白酶,即絲氨酸蛋白酶、半胱氨酸蛋白酶和金屬蛋白酶。其中絲氨酸蛋白酶活性最強(qiáng),約占總活性的65-75％。
　　 (2)在桂花開(kāi)放至衰老的過(guò)程中,蛋白酶活性持續(xù)上升,至盛花末期時(shí)達(dá)到峰值；至萎蔫期時(shí),

3、蛋白酶活性迅速下降。
　　 (3)用金屬蛋白酶抑制劑EGTA(10mM)和半胱氨酸蛋白酶抑制劑ZnCl2(1mM)處理桂花花枝,延緩了花瓣衰老,對(duì)花瓣蛋白酶活性的增強(qiáng)有一定的抑制作用。蛋白酶激活劑DTT(2mM)、MgSO4(2mM)處理桂花花枝,得到了相反的效果。
　　 (4)6-BA(1mg/L)處理桂花花枝,延緩了花瓣衰老0.4d,對(duì)花瓣蛋白酶活性的增強(qiáng)有一定的抑制作用。ABA(5mg/L)處理得到了相反的效果,瓶

4、插壽命縮短了0.4d。
　　 (5)建立了花瓣蛋白酶活性的底物膠電泳體系。酶提取液經(jīng)40℃處理10min,然后在含有0.10％明膠的12％的分離膠上進(jìn)行電泳,最后24h溫育反應(yīng)后活性帶明顯顯現(xiàn)。
　　 (6)底物膠電泳中總共檢測(cè)到3條蛋白酶帶,依其分子量命名為P1(180kD)、P2(94kD)和P3(63kD),其中活性最強(qiáng)的是蛋白酶P3。蛋白酶P2、P3為絲氨酸蛋白酶,蛋白酶P1則同時(shí)有半胱氨酸蛋白酶和絲氨酸蛋白酶活