廣州地區(qū)人呼吸道合胞病毒、副流感病毒及偏肺病毒等常見副粘病毒流行病學(xué)研究.pdf

1、目的：急性呼吸道感染為臨床上常見疾病，兒童及老年人發(fā)病率較高，病原體種類多。病毒感染與急性呼吸道感染發(fā)生及發(fā)展密切相關(guān)。副粘病毒科中呼吸道合包病毒（RSV），副流感病毒(PIVs)和偏肺病毒(hMPV)是常見的重要呼吸道病原體，可引起多種呼吸道疾病。目前實(shí)驗(yàn)室檢測方法以熒光定量 PCR和免疫熒光法為主，這2種方法有快速簡便特點(diǎn)，但無法獲取病毒毒株，尤其 hMPV，限制了對病毒進(jìn)一步的研究。因此建立3種副粘病毒分離培養(yǎng)方法獲取毒株，尤其是

2、hMPV，為今后研究提供物質(zhì)基礎(chǔ)，具有十分重要的意義。據(jù)報(bào)道3種副粘病毒在不同國家或地區(qū)不同人群中的發(fā)病率和所致疾病嚴(yán)重程度存在差異。廣州地區(qū)地處亞熱帶，常見3種副粘病毒感染，但受人口衛(wèi)生環(huán)境等因素影響，病毒的流行周期及所致疾病嚴(yán)重程度可能存在差異。但關(guān)于這方面的流行病學(xué)研究仍然甚少，尤其是較晚發(fā)現(xiàn)的hMPV。甚少研究同時(shí)囊括3種副粘病毒進(jìn)行流行病學(xué)研究，比較感染臨床特征，探索病毒間的差異。而且過去副粘病毒研究對象以兒童患者為主，較少闡

3、述病毒對成人的影響，比較二者之間病程差異。本研究通過收集廣州地區(qū)急性呼吸道感染患者的鼻咽拭子，建立適用于3種副粘病毒的細(xì)胞分離培養(yǎng)方法，尤其是 hMPV。同時(shí)描述3種副粘病毒在廣州地區(qū)的流行病學(xué)特點(diǎn)，比較RSV、PIVs和hMPV臨床特征，探索兒童與成人及3種病毒之間的臨床特征差異。
　　方法：⑴收集2009.7-2011.9間廣州地區(qū)急性呼吸道感染（ARTIs）患者的鼻咽拭子。熒光定量PCR（Real Time-PCR）檢測常見

4、呼吸道病毒。⑵挑選RSV、PIVs和hMPV陽性標(biāo)本各60份用于病毒細(xì)胞分離培養(yǎng)。本研究采用離心培養(yǎng)法進(jìn)行病毒分離培養(yǎng)。RSV和PIVs接種細(xì)胞后（HEp-2或LLC-MK2細(xì)胞）3,000rpm離心1h，連續(xù)培養(yǎng)5-10 d。由于hMPV較難培養(yǎng)，分離方法有所不同，使用離心培養(yǎng)法基礎(chǔ)上，接種 Vero-E6細(xì)胞，且盲傳3代，每代培養(yǎng)18 d。同時(shí)利用hMPV毒株比較不同病毒培養(yǎng)方法(轉(zhuǎn)鼓、離心和靜置培養(yǎng)法)對病毒復(fù)制效率影響。⑶統(tǒng)計(jì)3

5、種副粘病毒感染率及描述病毒人群和季節(jié)分布，整理患者信息（相關(guān)個(gè)人信息、實(shí)驗(yàn)室檢查信息和臨床特征等），應(yīng)用卡方檢驗(yàn)和Fisher確切概率法比較患者的臨床癥狀等，探索兒童與成人及3種病毒之間的臨床特征差異。
　　結(jié)果：本研究從2009年7月-2011年9月開始收集急性呼吸道感染患者的呼吸道標(biāo)本，共27個(gè)月，Real Time-PCR檢測5424例標(biāo)本，5111例標(biāo)本符合入選標(biāo)準(zhǔn)，兒童患者（≤15歲）標(biāo)本3089例，成人患者（≥15歲）

6、標(biāo)本2022例，男女比例是3094:2027。5111例標(biāo)本中，檢出hMPV陽性175例，占3.4％。RSV陽性576例（10.4%），高于PIV，205例（4.0%）。成功分離出14株RSV、19株P(guān)IVs和3株 hMPV。92.2%副粘病毒感染患者是兒童，兒童3種副粘病毒感染率28.5%（956/3089），高于成人患者3.7%（75/2022）。兒童患者中，3種副粘病毒患者的平均年齡，RSV

7、PV，p<0.001）。與兒童患者不同，成人患者平均年齡RSV>PIVs>hMPV。通過27個(gè)月對急性呼吸道感染患者常見副粘病毒的監(jiān)測發(fā)現(xiàn)，廣州地區(qū)3種副粘病毒流行周期是相互重疊，RSV為主導(dǎo)。RSV和hMPV的流行季節(jié)較為相似，與Influenza流行周期也重疊。RSV和hMPV流行高峰出現(xiàn)在晚冬和初春，hMPV流行高峰一般會比RSV晚1個(gè)月出現(xiàn)，PIVs以PIV1和PIV3檢出為主，占89.7%。PIV1和PIV3流行高峰相互重疊，

8、夏季和秋季。副粘病毒患者混合感染其他呼吸道病毒現(xiàn)象較為常見， Influenza、EV、HCoV和MP4種病原體是的3種病毒患者最?；旌细腥酒渌粑啦《?。比較3種副粘病毒臨床特征，兒童患者臨床癥狀較嚴(yán)重，成人患者病情較輕。兒童患者的臨床特征以發(fā)熱，咳嗽，咳痰，喘息，腹瀉，納差等為主。RSV與PIVs患兒常發(fā)展為肺炎，hMPV常發(fā)展為支氣管肺炎?！?歲的兒童比較中，RSV患者表現(xiàn)咳痰和厭吃更多，而PIVs患兒乏力和咽痛癥狀比其他2種病毒

9、顯著。發(fā)熱和肺部啰音是 hMPV患兒較顯著的臨床特征。成年人以流感樣癥狀為主， hMPV患者全身癥狀比RSV患者明顯。
　　結(jié)論：①建立RSV、PIVs和hMPV分離培養(yǎng)方法，應(yīng)用離心培養(yǎng)法能較有效分離出 RSV和PIVs。同時(shí)離心培養(yǎng)法與盲傳聯(lián)合應(yīng)用可實(shí)現(xiàn) hMPV分離培養(yǎng)，適合臨床病毒實(shí)驗(yàn)室。②描述了廣州地區(qū) RSV、PIVs和hMPV的流行病學(xué)特點(diǎn)，3種副粘病毒中，以RSV感染率最高，占主導(dǎo)。3種病毒流行周期相互重疊?！?歲