雞傳染性支氣管炎病毒N蛋白單克隆抗體制備及抗原表位鑒定.pdf

1、雞傳染性支氣管炎（infectious bronchitis，IB）是由傳染性支氣管炎病毒（infectious bronchitis virus，IBV）引起的嚴(yán)重危害世界養(yǎng)雞業(yè)的一種急性高度接觸性傳染病。目前，IB已在世界范圍內(nèi)廣泛流行。由于IB病型復(fù)雜，病原易發(fā)生變異，血清型眾多，容易發(fā)生免疫失敗，因此，目前仍是危害世界和我國養(yǎng)禽業(yè)的重要疫病之一。眾所周知，病毒的抗原表位在病毒侵染和抗病毒免疫中起著重要作用。IBV的N蛋白位于病毒

2、的內(nèi)部,在病毒復(fù)制、組裝中具有重要作用。鑒于此，本研究制備IBV N蛋白單克隆抗體并對其抗原表位進(jìn)行篩選與鑒定，IBV診斷方法和新型疫苗的研究提供信息。
　　本實驗利用濃縮的IBV致弱株CK/CH/LDL97ⅠF115病毒免疫6～8周齡的雌性BALB/c小鼠，采用傳統(tǒng)的雜交瘤技術(shù)，經(jīng)間接ELISA和有限稀釋法。經(jīng)篩選和克隆后獲得了一株抗雞傳染性支氣管炎病毒N蛋白單克隆抗體的雜交瘤細(xì)胞系,命名為2D2。單克隆抗體亞型鑒定結(jié)果顯示其免

3、疫球蛋白類型為IgG1型，輕鏈為κ鏈。ELISA和Western blot試驗結(jié)果表明所獲得的這株2D2可特異性針對IBV N蛋白。
　　為了詳細(xì)研究IBV N蛋白抗原表位結(jié)構(gòu)，對這株MAb2D2的表位精確定位，本研究利用PCR擴增了22個覆蓋N基因的片段，PCR產(chǎn)物分別克隆到pGEX-6p-1原核表達(dá)載體后，經(jīng)IPTG誘導(dǎo)均獲得了表達(dá)。利用MAb對重組蛋白進(jìn)行Western blot和ELISA反應(yīng)性掃描，結(jié)果顯示，單克隆抗體2