雞傳染性支氣管炎抗體ELISA診斷方法研究.pdf_第1頁(yè)
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1、雞傳染性支氣管炎病是傳染性支氣管炎病毒引起雞的一種急性、高度接觸性傳染病,是威脅集約化養(yǎng)雞場(chǎng)的主要疫病之一.該試驗(yàn)建立了一種用于檢測(cè)雞傳染性支氣管炎血清抗體的方便、特異、快速的檢測(cè)方法.方法:利用9日齡SPF雞胚尿囊腔復(fù)壯IBV,通過(guò)雞胚成纖維細(xì)胞傳代培養(yǎng)IBV,經(jīng)過(guò)蔗糖密度梯度離心純化病毒,測(cè)定蛋白含量(抗原濃度為7.7mg/ml),做系列稀釋包被酶標(biāo)板,利用過(guò)碘酸鹽法將辣根過(guò)氧化物酶標(biāo)記于兔抗雞IgG上,作為酶結(jié)合物(酶工作濃度為1

2、:800),也做一系列稀釋,利用棋盤(pán)滴定法,分別確定包被抗原、酶結(jié)合物以及血清稀釋度,用TMB作為顯色劑,建立了檢測(cè)血清樣品中傳染性支氣管炎抗體(陽(yáng)性臨界值判定標(biāo)準(zhǔn)為0.14)的ELISA檢測(cè)方法.結(jié)果:利用將IBV接種雞胚成纖維細(xì)胞的方法而制備的抗原可用于該試驗(yàn);與NDV,MDV,IBDV,AIV,APIV,REV,ILTV,IC,MG,MS等抗血清無(wú)交叉反應(yīng);與IBV Gray株、M株、Conn株、T株、B株、H株、Ark99株、S

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