小鼠形覺剝奪性近視中鞏膜后極部巨噬細胞分泌功能的研究.pdf

1、目的:近視是眼調節(jié)放松時，平行光線聚焦在視網膜前的一種屈光狀態(tài)。近視的發(fā)生與多種因素相關。到目前為止，多數學者認為近視與鞏膜后極部細胞外基質的重塑有關，但其具體機制仍不清楚，本課題組前期發(fā)現形覺剝奪性小鼠近視眼鞏膜后極部巨噬細胞增多，本研究將觀察近視形成過程中鞏膜后極部巨噬細胞是否參與了膠原的調控，從而研究后極部巨噬細胞對小鼠屈光發(fā)育及近視的影響。
　　方法:(1)采用出生后18日齡的野生型(wildtype，WT)雄性近交C57

2、BL/6小鼠為實驗動物。隨機將實驗動物分成形覺剝奪組(FDM組)和對照組(Control)，其中形覺剝奪組(FDM組)右眼用不透光的眼罩遮蓋，對側眼不做處理。對照組小鼠不做任何處理。在實驗后2周用紅外偏心驗光儀(EIR)檢測眼球屈光度，用光學斷層掃描儀(OCT)檢測眼球生物學參數。(2)免疫熒光雙染的方法檢測鞏膜后極部巨噬細胞分泌的細胞因子的改變:巨噬細胞包括M1型和M2型兩個亞型。其中F4/80標記總巨噬細胞（包括M1型和M2型），C

3、D206標記M2型巨噬細胞。分別用以下抗體MMP-2、 MMP-9、 TGF-β1、TGF-β2標記基質金屬蛋白酶2(MMP-2)、基質金屬蛋白酶9(MMP-9)、轉化生長因子(TGF-β1，TGF-β2，TGF-β3)。本研究采用冰凍切片免疫熒光雙染的方法及細胞計數的方法，比較實驗眼、對側眼以及對照組鞏膜后極部巨噬細胞分泌細胞因子（與膠原調控相關）的量。
　　結果:FDM眼與對側眼和對照組比較，明顯向近視偏移，屈光度有顯著統計學

4、差異，形成了明顯的近視（約-2.5D）(p＜0.01)，同時伴有眼軸的延長，玻璃體腔深度與前房厚度、晶體厚度無顯著統計學差異。1.FDM眼鞏膜后極部巨噬細胞數量有顯著增加(p＜0.01);鞏膜后極部分泌基質金屬蛋白酶-2（MMP-2）的細胞數量顯著高于對側眼和對照組;分泌MMP-2的巨噬細胞數量增加，有顯著統計學差異;FDM眼分泌MMP-2的巨噬細胞占鞏膜后極部總巨噬細胞的百分比為56.3％，較對側眼(20.1％)和對照組(19.7％)

5、有顯著增高。2.鞏膜后極部基質金屬蛋白酶-9(MMP-9)的表達與對側組和對照組相比無明顯統計學差異。3.FDM眼鞏膜后極部表達TGF-β1的細胞數量(67.2±26)低于對側組(91.4±12.7)和對照組(103.1±13.4)(p＜0.05)。FDM眼分泌TGF-β1的非巨噬細胞降低。4.FDM眼鞏膜后極部分泌TGF-β2的細胞數量(73.3±9.4)相比對側組(110±12.5)和對照組(119±27.8)增多(p＜0.05)，

6、主要來源于分泌TGF-β2的非巨噬細胞增多。FDM眼分泌TGF-β2的巨噬細胞占鞏膜后極部總巨噬細胞的百分比為27.6％，與對側眼(59.1％)和對照組(50.8％)相比，，降低有顯著統計學差異(p＜0.05)。5.FDM眼鞏膜后極部表達TGF-β3的細胞數量(114.7±23.0)明顯低于對側組(88.4±13.4)和對照組(87±12.6)(p＜0.05)。后極部分泌TGF-β3的非巨噬細胞數量下降。分泌TGF-β3的巨噬細胞占鞏膜

7、后極部總巨噬細胞的百分比在剝奪眼為54.0％，與對側眼(59.4％)和對照組(50.8％)相比，差異無顯著統計學意義(p=0.129)。
　　結論:1.形覺剝奪性近視中，鞏膜后極部巨噬細胞數量增多;分泌MMP-2，TGF-β2的細胞數增加;分泌TGF-β1，TGF-β3的細胞減少，MMP-9無變化。
　　2.巨噬細胞可能通過增加MMP-2分泌參與鞏膜膠原調控，進而間接參與近視。本實驗為巨噬細胞參與近視的可能提供了部分的依據。