IgA腎病腎小管間質(zhì)損傷及無創(chuàng)性標志物相關(guān)研究.pdf

1、目的：IgA腎病(IgA nephropathy，IgAN)是世界范圍內(nèi)最常見的原發(fā)性腎小球疾病，大多數(shù)患者進行性發(fā)展，約15-40％的患者在發(fā)病10-20年后進展到終末期腎病(ESRD)。腎小管間質(zhì)損傷(tubulointerstitial lesions，TIL)是影響IgAN預(yù)后的重要危險因素。腎活檢是目前診斷IgAN、判別其TIL的重要手段。由于腎活檢的有創(chuàng)性和風險性，難以反復(fù)施行，使許多患者延誤了診斷和及時治療，也不能有效隨訪

2、病情及觀察療效，因此臨床上迫切需要建立無創(chuàng)性診斷手段及尋找無創(chuàng)性標志物。本研究1.通過對IgAN患者的臨床病理資料多因素logistic回歸分析，篩選出與TIL相關(guān)的臨床獨立影響因素，在此基礎(chǔ)上建立判別TIL程度的函數(shù)模型，以期為臨床無創(chuàng)性評估TIL提供依據(jù)。2.對尿中性粒細胞明膠酶相關(guān)脂質(zhì)運載蛋白(NGAl)在IgAN中與臨床病理指標的相關(guān)性進行分析，探討其在IgAN患者TIL評估中的意義。3。采用磁珠分離系統(tǒng)聯(lián)合基質(zhì)輔助激光解析電離

3、-飛行時間質(zhì)譜(MALDI-TOF MS)探索IgAN無創(chuàng)性診斷模型及潛在的標志物。
　　 對象與方法：1.分析我院腎活檢確診的原發(fā)性IgAN患者1493例臨床病理資料，在模型組篩選出與TIL相關(guān)的臨床獨立影響因素，建立判別TIL的函數(shù)模型，并在獨立的驗證組中檢驗其判別效率。2.應(yīng)用酶聯(lián)免疫法(ELISA)檢測IgAN患者115例，非IgAN腎小球疾病對照組30例，健康對照組30例的尿NGAL水平，分析尿NGAL水平與IgAN患

4、者臨床及病理指標相關(guān)性。3.利用磁珠分離系統(tǒng)聯(lián)合MALDI-TOF MS分析IgAN患者32例、非IgAN疾病對照組36例、健康對照組30例的尿液多肽譜，采用ClinProTools2.0軟件主成分分析法和SVM算法建立鑒別診斷模型，對差異肽段經(jīng)混合型串聯(lián)傅立葉變換離子回旋共振質(zhì)譜(nano-LC-Q-FT-ICR-MS)進行鑒定。
　　 結(jié)果：1.(1)1493例lgAN患者中，TIL無病變組12.8％；輕度組47.6％；中度

5、組23.3％；重度組16.4％。(2)TIL與臨床指標中年齡、血壓、血肌酐、血尿酸、甘油三酯、膽固醇、24小時尿蛋白定量、尿NAG酶呈正相關(guān)，與血紅蛋白、血白蛋白、尿滲透壓呈負相關(guān)；與腎活檢病理指標中球性硬化、節(jié)段損傷、新月體、系膜增殖、血管壁增厚、血管玻璃樣變呈正相關(guān)。(3)建立函數(shù)模型1：在模型組經(jīng)logistic回歸分析，篩選出與有無TIL相關(guān)的臨床獨立影響因素，并建立判別有無TIL的函數(shù)模型，^PTIL1=e/1+eα，其中a=

6、-4.0585+0.9335BP-0.0169Hb+1.4382Scr+0.0026Ua+0.0841ALB+0.2972UP+0.034Age。模型的ROC曲線下面積為0.766，優(yōu)于各構(gòu)成指標的ROC曲線下面積，選定界值為0.83，判別函數(shù)的靈敏度81.5％，特異度33.3％，準確率88.4％，以此模型在驗證組進行驗證，驗證組的ROC曲線下面積為0.789，靈敏度81.0％，特異度31.2％，準確率87.6％。(4)建立函數(shù)模型2：

7、在模型組經(jīng)logistic回歸分析，篩選出與TIL是否達中重度相關(guān)的臨床獨立影響因素，并建立判別TIL程度的函數(shù)模型，^PTIL2=e/1+eb，其中b=-2.0187+0.8482BP-0.0317Hb+1.9032Scr+0.0050Ua+0.2539UP。模型的ROC曲線下面積為0.855，優(yōu)于各構(gòu)成指標的ROC曲線下面積。選定界值為0.43，函數(shù)判別的靈敏度66％，特異度91.1％，準確率81％，以此模型在驗證組進行驗證，驗證組

8、的ROC曲線下面積為0.851，靈敏度63.6％，特異度91.0％，準確率80.0％。
　　 2.(1)IgAN組、非IgAN疾病對照組較健康對照組尿NGAL水平均明顯升高，與健康對照組相比有統(tǒng)計學(xué)意義，P<0.01。(2) IgAN組尿NGAL水平與多項臨床病理指標明顯相關(guān)。(3)影響NGAL水平的獨立影響因素有血白蛋白水平，尿蛋白定量、尿NAG酶、尿滲透壓，以及球性硬化、間質(zhì)炎細胞浸潤、間質(zhì)纖維化、腎小管萎縮.(4)以尿NG

9、AL水平超過正常對照組2個標準差視為顯著增高，聯(lián)合NAG酶對有無TIL進行評估，ROC曲線下面積為0.850，明顯優(yōu)于血肌酐的0.675，靈敏度83.3％，特異度73.3％，準確率81.2％。
　　 3.(1)采用IMAC-Cu2+磁珠分離系統(tǒng)聯(lián)合MALDI-TOF MS提取多肽效果好，隨機選取其中10個峰進行觀察，日間-日內(nèi)變異系數(shù)均在10％以內(nèi)。(2)IgAN患者與健康對照、非IgAN疾病對照組的尿液多肽峰度表達存在明顯差異

10、，依據(jù)肽峰度表達的差異建立鑒別診斷模型，在兩兩比較中獲得的模型鑒別IgAN與健康對照時靈敏度、特異度均為100％；鑒別IgAN與疾病對照時靈敏度為85.7％，特異度為76.5％。三組比較獲得的模型在鑒別健康對照組準確率100％，鑒別IgAN組準確率71.4％，鑒別疾病對照組準確率76.9％。(3)鑒定得到了差異肽段m/z1913.14序列圖SGSVIDQSRVLNLGPITR，經(jīng)檢索確定為uromodulin(尿調(diào)蛋白)的肽段。此肽段表

11、達的峰度差異用于鑒別IgAN與健康對照組時ROC曲線下面積為0.998；在鑒別IgAN與疾病對照組時ROC曲線下面積為0.815。
　　 結(jié)論：1.IgAN患者中TIL的發(fā)生率較高，TIL與多項臨床病理指標相關(guān)。通過對IgAN患者TIL發(fā)生的臨床獨立影響因素分析建立了有無TIL及TIL是否達中重度的判斷函數(shù)模型，模型可重復(fù)性好，且有較好的ROC曲線下面積，對TIL病情判斷的準確性分別為88.4％、81％。為臨床上無創(chuàng)性判斷IgA

12、N患者TIL的程度、判斷病情，隨訪療效提供了參考。2.IgAN患者尿NGAL水平隨臨床病情的加重及病理指標積分的增加而明顯升高，可以反映IgAN病情程度。在聯(lián)合尿NGAL與尿NAG酶判別有無TIL時明顯優(yōu)于血肌酐及單純的尿NGAL、尿NAG酶、尿滲透壓等指標.3.采用IMAC-Cu2+磁珠分離系統(tǒng)聯(lián)合MALDI-TOF MS分析人尿液多肽譜有較好的穩(wěn)定性及可重復(fù)性。通過尿肽的峰度差異建立了IgAN與健康對照、疾病對照的鑒別診斷模型，有較