水通道蛋白1與母胎液體平衡相關(guān)性研究.pdf

1、母胎液體交換及羊水循環(huán)對于正常妊娠胎兒的活動、生長和發(fā)育至關(guān)重要；母胎液體平衡紊亂及羊水循環(huán)紊亂與不良的圍生結(jié)局密切相關(guān)，然而其發(fā)病的分子機制尚不清楚，目前也沒有有效的預(yù)防及治療措施。因此，探索母胎液體交換及羊水平衡紊亂的機理、尋找治療母胎液體平衡紊亂的作用靶點及藥物治療靶點將有助于降低圍產(chǎn)兒發(fā)病率及死亡率，減少新生兒的出生缺陷，提高圍產(chǎn)醫(yī)學質(zhì)量。 水通道蛋白一族廣泛存在于上皮和內(nèi)皮細胞膜上的小分子（28-30KD）糖蛋白，因其

2、介導自由水快速被動的跨生物膜轉(zhuǎn)運故名“水通道”。目前在哺乳動物細胞膜上已發(fā)現(xiàn)了13種水通道蛋白（AQP0-12）。近20年的研究結(jié)果顯示：AQP1廣泛分布泌尿、呼吸、消化、神經(jīng)、生殖等系統(tǒng)，參與機體的與水代謝相關(guān)的多個臟器的生理和病理過程。本課題組的前期工作系統(tǒng)描述了AQP1在人胎盤與胎膜組織中的表達與分布，首次研究臨床羊水量異常病例胎盤與胎膜組織中AQPs表達的變化，發(fā)現(xiàn)羊水過少臨床病例胎盤組織和胎膜組織AQP1 mRNA表達顯著低于

3、正常晚期妊娠胎盤組織和胎膜，這些結(jié)果提示AQP1在母-胎液體交換過程中可能發(fā)揮重要作用?；蚯贸夹g(shù)的發(fā)展為研究基因的功能和表達調(diào)控及人類多種疾病的分子機制開辟了新途徑。AQP1基因敲除鼠的建立為AQP1在多個臟器及組織（腎臟、肺、腦、眼等）的水轉(zhuǎn)運中發(fā)揮作用提供了直接證據(jù)，但是AQP1基因敲除鼠妊娠相關(guān)表型的變化罕見報道。 本研究擬應(yīng)用AQP1基因敲除小鼠模型對其妊娠期羊水量、胎兒情況及胎盤情況進行動態(tài)物理及分子檢測，探尋AQ

4、P1缺失后母胎液體平衡的變化，以提供AQPs在母-胎液體交換發(fā)揮作用的直接證據(jù)，尋找可能應(yīng)用于臨床的藥物靶點和治療靶點。 第1章 AQP1在小鼠胎盤、胎膜組織的表達 [研究目的]研究水通道蛋白1（AQP1）在小鼠胎盤、胎膜組織的分布及表達，初步探討AQP1在母胎液體平衡及羊水循環(huán)中的作用。 [材料與方法]取四只孕13天成年健康CD-1純系野生型小鼠胎盤、胎膜組織（每只孕鼠分別選取一例），應(yīng)用逆轉(zhuǎn)錄-聚合酶鏈反應(yīng)（

5、RT-PCR）技術(shù)及免疫組織化學技術(shù)檢測AQP1胎盤及胎膜組織中的表達，確定AQP1表達部位及范圍。 [結(jié)果] 1.RT-PCR技術(shù)證實AQP1在CD-1野生型孕鼠胎盤、胎膜組織表達； 2.免疫組織化學方法發(fā)現(xiàn)AQP1表達于小鼠羊膜上皮細胞、胎盤血管內(nèi)皮細胞和滋養(yǎng)細胞； [結(jié)論] CD-1純系野生型孕鼠胎盤、胎膜組織均有AQP1在mRNA和蛋白水平的表達，提示AQP1可能在母胎液體平衡中發(fā)揮作用

6、。 第二章小鼠AQP1缺失后妊娠相關(guān)表型的變化 [研究目的]研究AQP1基因缺失后胎兒及附屬物的變化，從而尋找AQP1在母胎液體平衡中發(fā)揮作用的直接證據(jù)。 [材料與方法]將純合子AQP1基因敲除小鼠（AQP1-KO mice）按雌雄2：1的比例合籠交配，第二日檢出陰道栓者記為妊娠第1天（1dpc）。根據(jù)孕齡將AQP1基因敲除孕鼠分組；相同條件下對CD-1純系野生小鼠合籠交配及分組。 1.將兩組按孕齡（孕7

7、天、13天、16天、18天和足月分娩）分為五個小組，動態(tài)記錄孕鼠胚胎數(shù)、肉眼可見的萎縮胚胎數(shù)及新生鼠仔數(shù)； 2.按孕齡（孕13天、16天、18天）記錄胎鼠重量，胎盤濕重，胎盤面積及羊水量；另取孕16天的羊水樣本測量離子成分及滲透壓； 3.取兩組孕13天的胎盤組織，采用HE染色觀察AQP1缺失后小鼠胎盤組織的變化； 4.統(tǒng)計學方法：單因素方差分析及卡方檢驗用來做統(tǒng)計學檢測。 [結(jié)果] 1.與同孕齡野

8、生鼠相比，AQP1基因敲除鼠的孕囊數(shù)目隨著妊娠天數(shù)的延長而進行性下降；肉眼可見的萎縮胚胎數(shù)在妊娠18天時顯著高于野生鼠； 2.AQP1基因敲除鼠胎鼠在妊娠16天、18天及新生鼠的體重明顯低于同齡野生鼠； 3.AQP1基因敲除鼠的羊水量在妊娠的13、16、18天明顯高于野生鼠；且妊娠16天羊水中尿素、肌酐水平下降，表現(xiàn)為低滲狀態(tài)； 4.孕13天AQP1基因敲除鼠胎盤組織質(zhì)量明顯大于同孕齡野生鼠，而孕18天卻明顯低于

9、同孕齡野生鼠； 5.胎盤HE染色：CD-1純系野生鼠胎盤HE染色可見正常小鼠胎盤三層結(jié)構(gòu)：大滋養(yǎng)細胞層，可見多倍體巨細胞；海綿樣滋養(yǎng)層，其組織疏松、均勻，內(nèi)見多倍體滋養(yǎng)細胞及二倍體滋養(yǎng)細胞；迷路樣滋養(yǎng)層，血管網(wǎng)與滋養(yǎng)細胞交互纏繞形成迷路樣結(jié)構(gòu)，其內(nèi)血運豐富；而AQP1基因敲除鼠胎盤大滋養(yǎng)細胞層顯示不清；海綿樣滋養(yǎng)層少見大滋養(yǎng)細胞，層內(nèi)網(wǎng)眼間隙變窄或消失，血管腔變形管壁僵硬；迷路樣結(jié)構(gòu)顯示不清，其內(nèi)血運欠豐。 [結(jié)論]