自噬對胰腺脂質(zhì)沉積及胰島素敏感性的影響.pdf

1、目的:建立高脂飲食所致肥胖大鼠模型,同時給予自噬抑制劑干預,檢測胰腺脂質(zhì)沉積程度與自噬相關(guān)蛋白LC3的表達情況,分析自噬對胰腺脂質(zhì)沉積及胰島素敏感性的影響;觀察不同糖耐量人群胰腺脂質(zhì)沉積與胰島素敏感性的差異,探討胰腺脂質(zhì)沉積與胰島素抵抗的關(guān)系,為進一步探討自噬在人體內(nèi)2型糖尿病發(fā)生發(fā)展中可能的作用提供參考依據(jù)。
　　方法:
　　1.實驗研究:8周齡雄性SD大鼠30只適應性喂養(yǎng)7天后隨機平均分為普通喂養(yǎng)(NC)組、高脂喂養(yǎng)(H

2、F)組和高脂喂養(yǎng)加氯喹干預(HFC)組,12周后采集空腹血檢測甘油三酯(TG)和總膽固醇(TC)和空腹血糖(FBG)、胰島素(Fins)含量,計算穩(wěn)態(tài)模型胰島素抵抗(HOMA-IR)指數(shù)評估胰島素敏感性;口服葡萄糖耐量試驗(OGTT),評估大鼠糖耐量水平;胰腺組織切片行HE染色,觀察各組大鼠胰腺組織形態(tài)及脂質(zhì)沉積情況;Western blot法檢測胰腺組織自噬相關(guān)蛋白LC3表達水平。
　　2.臨床研究:納入受試者120例,分為糖耐

3、量正常的對照(NC)組37例,糖調(diào)節(jié)受損(IGR,包括空腹血糖調(diào)節(jié)受損和糖耐量異常)組37例,2型糖尿病(T2DM)組46例,收集身高、體重、腰圍、臀圍,計算體質(zhì)量指數(shù)(BMI)、腰臀比(WHR)、收縮壓(SBP)、舒張壓(DBP);空腹10小時留取外周血分離血清,采用全自動生化分析儀檢測FBG、糖負荷后2小時血糖(2hPG)、TG、TC、高密度脂蛋白膽固醇(HDL-C)、低密度脂蛋白膽固醇(LDL-C)水平。采用放射免疫法(RIA)檢

4、測Fins和糖負荷后2小時胰島素(Ins)水平;采用穩(wěn)態(tài)模型評估HOMA-IR和HOMA-β指數(shù);所有受試者均接受上腹部計算機斷層掃描(computed tomography,CT)技術(shù)平掃,用脾胰CT差值評估胰腺脂質(zhì)沉積程度,以肝脾CT比值評估肝臟脂質(zhì)沉積;采用SPSS13.0軟件分析自噬、胰腺脂質(zhì)沉積的組間差異及其與各項指標的相關(guān)性。
　　結(jié)果:
　　1.實驗研究結(jié)果:
　　1.1、三組大鼠生長指標的比較
　

5、　各組大鼠基線體重、體長、腰圍等生長指標差異無統(tǒng)計學意義,至實驗第12周時高脂喂養(yǎng)的HF組、HFC組大鼠體重、Lee's指數(shù)、腰圍(WC)較普通喂養(yǎng)NC組大鼠明顯增加,差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05)。
　　1.2、三組大鼠OGTT結(jié)果的比較
　　OGTT試驗結(jié)果顯示,HF組、HFC組大鼠各時點血糖值和葡萄糖曲線下面積(AUCG)均高于NC組(P<0.05),血糖在OGTT20'達到血糖峰值,后長時間處于較高水平,而NC組在

6、OGTT40'達血糖峰值后逐漸降至正常水平。
　　1.3、三組大鼠糖脂代謝及胰島素敏感性的比較
　　HF組、HFC組大鼠的FBG、TG、TC和Fins均較NC組明顯升高,HOMA-IR在3組中逐漸增加,而HOMA-β指數(shù)明顯降低(P<0.05)。
　　1.4、三組大鼠胰腺形態(tài)和脂質(zhì)沉積的比較
　　胰腺組織病理切片HE染色結(jié)果顯示,NC組大鼠胰腺組織內(nèi)未見明顯的脂滴空泡,HF組大鼠胰腺組織細胞內(nèi)空泡數(shù)量較NC組明顯

7、增加;而HFC組胰島內(nèi)大量脂滴空泡形成,胰島周圍可見脂肪組織浸潤。
　　采用圖像分析軟件,計算每高倍視野(小葉內(nèi)、小葉間)內(nèi)脂肪細胞的百分比,發(fā)現(xiàn)胰腺脂肪沉積程度在NC、HF及HFC三組間逐漸增加,差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05)。
　　1.5、胰腺脂質(zhì)沉積與代謝指標的相關(guān)性分析
　　線性相關(guān)分析表明,胰腺脂質(zhì)沉積與體重、Lee’s指數(shù)、WC、TG、TC、FBG、Fins、HOMA-IR指數(shù)呈正相關(guān),多元回歸分析表明,

8、HOMA-IR指數(shù)、TC是胰腺脂質(zhì)沉積的獨立影響因素。
　　1.6、三組大鼠胰腺自噬蛋白LC3表達的比較
　　在相對分子量16ku附近可見LC3蛋白雜交條帶,經(jīng)光密度分析顯示,NC組蛋白表達基本相同,HF組蛋白表達較NC組明顯升高,而HFC組則明顯降低(P<0.05)。
　　2.臨床研究結(jié)果:
　　2.1、三組一般臨床資料和生化特征
　　NC組、IGR組、T2DM各組間性別、年齡、SBP、DBP、LDL-C

9、差異無統(tǒng)計學意義(均P>0.05)。
　　IGR組和T2DM組WHR、FBG、Fins、2hPG、Ins、HOMA-IR指數(shù)較NC組升高,T2DM組BMI、TG、TC較其余兩組明顯增加,而HDL-C、HOMA-β指數(shù)則明顯降低,差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05)。
　　2.2、各組脾胰CT差值和肝脾CT比值的差異
　　IGR組較NC組脾胰CT差值升高,肝脾CT比值降低,但差異無統(tǒng)計學意義,T2DM組脾胰CT差值較NC組、

10、IGR組均明顯增加,肝脾CT比值明顯降低,差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05)。
　　2.3、脾胰CT差值與其他指標的相關(guān)性分析
　　線性相關(guān)分析表明,脾胰CT差值與HOMA-IR、HOMA-β、肝脾CT比值、年齡、BMI、WHR、FBG、FIns、2hPG、Ins、TG、TC及HDL相關(guān)(R分別為0.758,-0.549,-0.732,0.283,0.657,0.687,0.683,0.734,0.659,0.311,0.55

11、9,0.460,-0.294,P<0.05),與SBP、DBP、LDL-C無顯著相關(guān)性。
　　多元逐步回歸分析顯示,HOMA-IR、肝脾CT比值、BMI、WHR、年齡、TC與脾胰CT差值獨立相關(guān),可能是胰腺脂質(zhì)沉積的獨立影響因素(P<0.05)。
　　結(jié)論:
　　1.高脂飲食能誘導肥胖、糖脂代謝紊亂和胰腺脂質(zhì)沉積,加重IR和β細胞功能障礙。
　　2.高脂飲食可引起胰腺組織自噬激活,可能是一種代償性保護機制。