gAcrp30對高糖高脂喂養(yǎng)的巴馬豬血糖及胰島素敏感性的影響.pdf

1、目的:體外表達脂聯(lián)素的球狀區(qū)域(gAcrp30),研究重組gAcrp30對高糖高脂飲食喂養(yǎng)的巴馬小型豬血糖及胰島素敏感性的影響。
　　方法:轉(zhuǎn)化已知質(zhì)粒pET32a-gAcrp30至大腸桿菌BL21(DE3),用IPTG誘導(dǎo)表達重組蛋白gAcrp30。通過改變誘導(dǎo)劑IPTG濃度,改變誘導(dǎo)時間以及在不同的OD600下誘導(dǎo),檢測對gAcrp30蛋白表達量的影響。BL21(DE3)-pET32a-gAcrp30在IPTG誘導(dǎo)后,重組蛋白

2、gAcrp30主要以包涵體的形式存在,將該包涵體溶解、稀釋復(fù)性后,用Ni-NTA親和柱對其純化。多次注射家兔重組蛋白,制備其抗體, Western-blot(免疫印跡法)檢測抗體的效價。巴馬小型豬喂養(yǎng)高糖高脂飼料6個月,構(gòu)建動物模型,腹腔注射gAcrp30,用Western blot檢測血漿中脂聯(lián)素水平。觀察給藥后血漿葡萄糖水平及胰島素敏感性變化,評估重組脂聯(lián)素的藥效性。
　　結(jié)果:當(dāng)誘導(dǎo)劑IPTG濃度為1mM時,誘導(dǎo)時間為3h,

3、且細菌OD600值為0.6時進行誘導(dǎo),此時重組蛋白gAcrp30表達量最高。在大腸桿菌中表達 gAcrp30, Ni-NTA親和柱對菌體蛋白純化,最終得到純度達95％的可溶蛋白。一次性注射gAcrp30后,動物血液gAcrp30水平上升20%~30%,血糖濃度顯著降低(p<0.05)。口服糖耐量(OGTT)實驗表明脂聯(lián)素改善了胰島素敏感性。
　　結(jié)論: gAcrp30表達量的多少與誘導(dǎo)劑IPTG的濃度和IPTG的誘導(dǎo)時間以及何時誘