ERβ在乳腺癌組織中的表達(dá)及其與MMP2、MMP9、MFN2、KLF4關(guān)系的研究.pdf

1、目的:乳腺癌是全球女性常見的惡性腫瘤之一。我國雖不是乳腺癌的高發(fā)國家,但隨著社會(huì)的進(jìn)步,人類生活質(zhì)量的提高及生態(tài)環(huán)境的變化,乳腺癌的發(fā)病率較以前逐漸增高,并且出現(xiàn)明顯的年輕化趨勢,因此乳腺癌的發(fā)病機(jī)制和治療仍然倍受重視。乳腺癌是雌激素相關(guān)性疾病,雌激素通過與雌激素受體結(jié)合發(fā)揮作用。已有研究顯示雌激素受體ERα、ERβ是乳腺癌主要相關(guān)受體。ERα是發(fā)現(xiàn)最早的雌激素受體,曾經(jīng)被視為乳腺癌中唯一作用的受體而倍受關(guān)注。1996年ERβ的發(fā)現(xiàn),使

2、人們對(duì)雌激素受體有了更多的認(rèn)識(shí),ERβ逐漸成為研究的熱點(diǎn)。然而至目前為止,ERβ在乳腺癌中的生物學(xué)行為尚無統(tǒng)一定論,有研究認(rèn)為ERβ的過表達(dá)可導(dǎo)致腫瘤的發(fā)生,亦有研究顯示ERβ基因作為抑癌基因?qū)φ５慕M織起保護(hù)作用。ERβ基因作為轉(zhuǎn)錄因子在乳腺癌的發(fā)生發(fā)展中起著重要的作用,然而在對(duì)乳腺癌的研究中,有關(guān)與ERβ表達(dá)相關(guān)的基因國內(nèi)、外報(bào)道較少。為了進(jìn)一步了解ERβ在乳腺癌發(fā)病中的作用,為臨床研究提供更多的參考依據(jù),我們通過PubMed數(shù)據(jù)庫

3、進(jìn)行了啟動(dòng)子序列分析,發(fā)現(xiàn)MMP2、MMP9、MFN2、KLF4基因的啟動(dòng)子序列的堿基互補(bǔ)序列與ERβ的堿基序列大體相同,因此推測ERβ的表達(dá)可能與MMP2、MMP9、MFN2、KLF4的表達(dá)具有相關(guān)性。本研究采用蛋白質(zhì)印跡技術(shù)(Westem blot)及逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反應(yīng)(reverse transcription-polymerasechain reaction,RT-PCR)技術(shù)分別從蛋白水平和基因水平(mRNA)檢測ERβ在乳腺

4、癌組織及乳腺正常組織中的表達(dá)情況,分析其與乳腺癌相關(guān)臨床指標(biāo)的關(guān)系,探討ERβ與MMP2、MMP9、MFN2、KLF4表達(dá)的關(guān)系,以期在印證我們假設(shè)的同時(shí),為乳腺癌發(fā)病機(jī)制的研究及其治療策略的制定提供新的理論依據(jù)。
　　 方法:采用蛋白質(zhì)印跡技術(shù)(Westem blot)及逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反應(yīng)(reverse transcription-polymerase chain reaction,RT-PCR)技術(shù)分別從蛋白水平和基因水平

5、(mRNA)檢測ERβ在乳腺癌組織及乳腺正常組織的表達(dá)情況,分析乳腺癌組織中ERβ的表達(dá)與乳腺癌患者年齡、月經(jīng)狀況、腫瘤大小、臨床分期、組織學(xué)分級(jí)、病理類型、腋淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移數(shù)目等臨床病理學(xué)指標(biāo)的關(guān)系;并探討ERβ與MMP2、MMP9、MFN2、KLF4表達(dá)的關(guān)系。
　　 結(jié)果:
　　 1、ERβ基因在乳腺癌組織及乳腺正常組織中的表達(dá)
　　 1.1、ERβ基因在mRNA水平表達(dá)
　　 ERβmRNA在乳腺癌組

6、織和正常組織中的陽性表達(dá)率分別為70.70％(28/40)和97.50％(39/40),經(jīng)統(tǒng)計(jì)學(xué)分析,二組間差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(x2=11.114; P=0.001＜0.05),且ERβmRNA在乳腺癌組織中表達(dá)的陽性率比其在正常組織中的陽性表達(dá)率低。
　　 1.2、ERβ基因在蛋白水平表達(dá)
　　 ERβ蛋白在乳腺癌組織和正常組織中的陽性表達(dá)率分別為69.46％(27/40)和92.50％(37/40),經(jīng)統(tǒng)計(jì)學(xué)分析,二

7、組間差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(x2=7.812; P=0.005＜0.05),且ERβ蛋白在乳腺癌組織中的表達(dá)的陽性率比其在正常組織中的陽性表達(dá)率低。
　　 2、ERβ在乳腺癌組織中的表達(dá)與臨床病理因素的關(guān)系
　　 2.1、ERβmRNA的表達(dá)與臨床病理因素的關(guān)系
　　 2.1.1、患者年齡40例乳腺癌患者中,年齡≤50歲的患者中有9例ERβmRNA表達(dá)陽性,7例患者ERβmRNA表達(dá)陰性,年齡＞50歲的患者中有19例

8、ERβmRNA表達(dá)陽性,5例ERβmRNA表達(dá)陰性。經(jīng)統(tǒng)計(jì)學(xué)分析,ERβmRNA的表達(dá)在年齡分布中無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(x2=1.434; P=0.231＞0.05)。
　　 2.1.2、患者月經(jīng)狀況40例乳腺癌患者中,未絕經(jīng)患者中有11例ERβmRNA表達(dá)陽性,6例患者ERβmRNA表達(dá)陰性,絕經(jīng)患者中有17例ERβmRNA表達(dá)陽性,6例患者ERβmRNA表達(dá)陰性。經(jīng)統(tǒng)計(jì)學(xué)分析,ERβmRNA的表達(dá)在月經(jīng)狀況中的分布無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(x2

9、=0.395;P=0.530＞0.05)。
　　 2.1.3、腫瘤大小40例乳腺癌患者中,腫瘤直徑≤2cm的患者中有12例ERβ mRNA表達(dá)陽性,6例患者ERβmRNA表達(dá)陰性;腫瘤直徑為2-5cm的患者中,15例患者ERβmRNA表達(dá)陽性,5例患者ERβmRNA表達(dá)陰性;腫瘤直徑≥5cm的患者中有1例ERβmRNA表達(dá)陽性,1例患者ERβmRNA表達(dá)陰性。經(jīng)統(tǒng)計(jì)學(xué)分析,ERβmRNA的表達(dá)在腫瘤直徑大小的分布無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(x

10、2=0.173; P=0.677＞0.05)。
　　 2.1.4、組織學(xué)分級(jí)40例乳腺癌患者中,組織學(xué)分級(jí)為Ⅰ級(jí)的患者中有8例ERβmRNA表達(dá)陽性,1例患者ERβmRNA表達(dá)陰性,組織學(xué)分級(jí)為Ⅱ級(jí)的患者中有14例ERβmRNA表達(dá)陽性,9例患者ERβmRNA表達(dá)陰性,組織學(xué)分級(jí)為Ⅲ級(jí)的患者中有6例ERβmRNA表達(dá)陽性,2例患者ERβmRNA表達(dá)陰性。經(jīng)統(tǒng)計(jì)學(xué)分析,ERβmRNA的表達(dá)在組織學(xué)分級(jí)的分布無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(x2=0.

11、983; P=0.321＞0.05)。
　　 2.1.5、臨床分期40例乳腺癌患者中,臨床分期為Ⅰ期的患者中有8例ERβmRNA表達(dá)陽性,5例患者ERβmRNA表達(dá)陰性,臨床分期為Ⅱ期的患者中有15例ERβmRNA表達(dá)陽性,6例患者ERβmRNA表達(dá)陰性,臨床分期為Ⅲ期的患者中有5例ERβmRNA表達(dá)陽性,1例患者ERβmRNA表達(dá)陰性。經(jīng)統(tǒng)計(jì)學(xué)分析,ERβmRNA的表達(dá)在臨床分期的分布無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(x2=0.195;P=0.6

12、58＞0.05)。
　　 2.1.6、腋窩淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移情況40例乳腺癌患者中,腋窩淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移陰性的患者中有14例ERβmRNA表達(dá)陽性,9例患者ERβmRNA表達(dá)陰性,腋窩淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移陽性的患者中有14例ERβmRNA表達(dá)陽性,3例患者ERβmRNA表達(dá)陰性。經(jīng)統(tǒng)計(jì)學(xué)分析,ERβmRNA的表達(dá)在腋窩淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移情況中分布無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(x2=2.148; P=0.143＞0.05)。
　　 2.1.7、病理類型40例乳腺癌患者中

13、,病理類型為浸潤性導(dǎo)管癌患者中有22例ERβmRNA表達(dá)陽性,11例患者ERβmRNA表達(dá)陰性,病理類型為其它的患者中有6例ERβmRNA表達(dá)陽性,1例患者ERβmRNA表達(dá)陰性。經(jīng)統(tǒng)計(jì)學(xué)分析,ERβmRNA的表達(dá)在病理類型的分布無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(x2=0.297; P=0.586＞0.05)。
　　 2.2、ERβ蛋白表達(dá)與臨床病理因素的關(guān)系
　　 2.2.1、患者年齡40例乳腺癌患者中,年齡≤50歲的患者中有9例ERβ蛋

14、白表達(dá)陽性,7例患者ERβ蛋白表達(dá)陰性,年齡＞50歲的患者中有18例ERβ蛋白表達(dá)陽性,6例患者ERβ蛋白表達(dá)陰性。經(jīng)統(tǒng)計(jì)學(xué)分析,ERβ蛋白的表達(dá)在年齡分布中無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(x2=1.538; P=0.215＞0.05)。
　　 2.2.2、患者月經(jīng)狀況40例乳腺癌患者中,未絕經(jīng)患者中有10例ERβ蛋白表達(dá)陽性,7例患者ERβ蛋白表達(dá)陰性,絕經(jīng)患者中有17例ERβ蛋白表達(dá)陽性,6例患者ERβ蛋白表達(dá)陰性。經(jīng)統(tǒng)計(jì)學(xué)分析,ERβ蛋白的

15、表達(dá)在絕經(jīng)狀況中的分布無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(x2=1.015; P=0.314＞0.05)。
　　 2.2.3、腫瘤大小40例乳腺癌患者中,腫瘤直徑≤2cm的患者中有12例ERβ蛋白表達(dá)陽性,6例患者ERβ蛋白表達(dá)陰性;腫瘤直徑為2-5cm的患者中,有14例ERβ蛋白表達(dá)陽性,6例患者ERβ蛋白表達(dá)陰性;腫瘤直徑≥5cm的患者中,有1例ERβ蛋白表達(dá)陽性,1例患者ERβ蛋白表達(dá)陰性。經(jīng)統(tǒng)計(jì)學(xué)分析,ERβ蛋白的表達(dá)在腫瘤直徑大小的分布無統(tǒng)

16、計(jì)學(xué)差異(x2=0.010; P=0.919＞0.05)。
　　 2.2.4、組織學(xué)分級(jí)40例乳腺癌患者中,組織學(xué)分級(jí)為Ⅰ級(jí)的患者中有7例ERβ蛋白表達(dá)陽性,2例患者ERβ蛋白表達(dá)陰性,組織學(xué)分級(jí)為Ⅱ級(jí)的患者中有14例ERβ蛋白表達(dá)陽性,9例患者ERβ蛋白表達(dá)陰性,組織學(xué)分級(jí)為Ⅲ級(jí)的患者中有6例ERβ蛋白表達(dá)陽性,2例患者ERβ蛋白表達(dá)陰性。經(jīng)統(tǒng)計(jì)學(xué)分析,ERβ蛋白的表達(dá)在組織學(xué)分級(jí)的分布無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(x2=0.118; P=0

17、.731＞0.05)。
　　 2.2.5、臨床分期40例乳腺癌患者中,臨床分期為Ⅰ期的患者中有8例ERβ蛋白表達(dá)陽性,5例患者ERβ蛋白表達(dá)陰性,臨床分期為Ⅱ期的患者中有14例ERβ蛋白表達(dá)陽性,7例患者ERβ蛋白表達(dá)陰性,臨床分期為Ⅲ期的患者中有5例ERβ蛋白表達(dá)陽性,1例患者ERβ蛋白表達(dá)陰性。經(jīng)統(tǒng)計(jì)學(xué)分析,ERβ蛋白的表達(dá)在臨床分期的分布無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(x2=0.039; P=0.843＞0.05)。
　　 2.2.

18、6、腋窩淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移狀況40例乳腺癌患者中,腋窩淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移陰性的患者中有14例ERβ蛋白表達(dá)陽性,9例患者ERβ蛋白表達(dá)陰性,腋窩淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移陽性的患者中有13例ERβ蛋白表達(dá)陽性,4例患者ERβ蛋白表達(dá)陰性。經(jīng)統(tǒng)計(jì)學(xué)分析,ERβ蛋白的表達(dá)在腋窩淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移情況中分布無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(x2=1.085; P=0.298＞0.05)。
　　 2.2.7、病理類型40例乳腺癌患者中,病理類型為浸潤性導(dǎo)管癌患者中有21例ERβ蛋白表達(dá)陽性,12

19、例患者ERβ蛋白表達(dá)陰性,病理類型為其它的患者中有6例ERβ蛋白表達(dá)陽性,1例患者ERβ蛋白表達(dá)陰性。經(jīng)統(tǒng)計(jì)學(xué)分析,ERβ蛋白的表達(dá)在病理類型的分布無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(x2=0.474;P=0.491＞0.05)。
　　 3、ERβ與MMP2、MMP9、MFN2、KLF4表達(dá)的關(guān)系
　　 3.1、ERβ與MMP2、MMP9、MFN2、KLF4在mRNA水平表達(dá)的關(guān)系
　　 3.1.1、ERβ與MMP2 mRNA表達(dá)的關(guān)

20、系
　　 在mRNA表達(dá)水平,經(jīng)統(tǒng)計(jì)學(xué)分析,ERβ與MMP2的表達(dá)不存在直線相關(guān)性(P=0.207＞0.05)。
　　 3.1.2、ERβ與MMP9 mRNA表達(dá)的關(guān)系
　　 在mRNA表達(dá)水平,經(jīng)統(tǒng)計(jì)學(xué)分析,ERβ與MMP9的表達(dá)不存在直線相關(guān)性(P=0.498＞0.05)。
　　 3.1.3、ERβ與MFN2 mRNA表達(dá)的關(guān)系
　　 在mRNA表達(dá)水平,經(jīng)統(tǒng)計(jì)學(xué)分析,ERβ與MFN2的表達(dá)存

21、在直線相關(guān)性具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(r=0.492; P=0.009＜0.05),且兩者正相關(guān)。
　　 3.1.4、ERβ與KLF4 mRNA表達(dá)的關(guān)系
　　 在mRNA表達(dá)水平,經(jīng)統(tǒng)計(jì)學(xué)分析,ERβ與KLF4的表達(dá)不存在直線相關(guān)性(P=0.689＞0.05)。
　　 3.2、ERβ與MMP2、MMP9、MFN2、KLF4在蛋白水平表達(dá)的關(guān)系
　　 3.2.1、ERβ與MMP2蛋白表達(dá)的關(guān)系
　　 在蛋白

22、表達(dá)水平,經(jīng)統(tǒng)計(jì)學(xué)分析,ERβ與MMP2的表達(dá)不存在直線相關(guān)性(P=0.300＞0.05)。
　　 3.2.2、ERβ與MMP9蛋白表達(dá)的關(guān)系
　　 在蛋白表達(dá)水平,經(jīng)統(tǒng)計(jì)學(xué)分析,ERβ與MMP9的表達(dá)不存在直線相關(guān)性(P=0.695＞0.05)。
　　 3.2.3、ERβ與MFN2蛋白表達(dá)的關(guān)系
　　 在蛋白表達(dá)水平,經(jīng)統(tǒng)計(jì)學(xué)分析,ERβ與MFN2的表達(dá)存在直線相關(guān)性具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(r=0.561;P=

23、0.002＜0.05),且兩者正相關(guān)。
　　 3.2.4、ERβ與KLF4蛋白表達(dá)的關(guān)系
　　 在蛋白表達(dá)水平,經(jīng)統(tǒng)計(jì)學(xué)分析,ERβ與KLF4的表達(dá)不存在直線相關(guān)性(P=0.218＞0.05)。
　　 結(jié)論:
　　 1、在基因和蛋白兩個(gè)水平上,ERβ在乳腺癌組織中的表達(dá)均低于其在乳腺正常組織中的表達(dá)。表明ERβ的表達(dá)下降或缺失可能導(dǎo)致乳腺細(xì)胞的增生及癌變。
　　 2、在基因和蛋白兩個(gè)水平上,ERβ