ROCKⅡ、核因子-kappaB及COX-2在偏頭痛模型大鼠腦干的表達(dá)變化.pdf

1、研究背景: 偏頭痛（Migraine）為發(fā)作性神經(jīng)-血管功能障礙，以反復(fù)發(fā)作的一側(cè)或雙側(cè)頭痛為特征。其發(fā)病機(jī)制復(fù)雜，目前仍未闡明，研究認(rèn)為三叉神經(jīng)血管系統(tǒng)激活導(dǎo)致硬腦膜無(wú)菌性炎癥是偏頭痛發(fā)病機(jī)制的關(guān)鍵環(huán)節(jié)。 Rho激酶是Rho蛋白下游最主要的靶效應(yīng)分子，包括兩種形式ROCKⅠ和ROCKⅡ，其中ROCKⅡ主要在中樞神經(jīng)系統(tǒng)表達(dá)。Rho/ROCK通路在慢性疼痛的發(fā)展和維持中起著重要作用。有研究表明，在腫瘤、高血壓等相關(guān)疾病

2、中發(fā)現(xiàn)Rho-NF-κB軸的存在，Rho激酶抑制劑能抑制NF-κB的激活。 核因子-kappaB（nuclear factor-kappaB，NF-κB）是細(xì)胞內(nèi)普遍存在的一種介導(dǎo)細(xì)胞內(nèi)信號(hào)傳遞的快反應(yīng)轉(zhuǎn)錄因子，可調(diào)控多種基因的表達(dá)。有研究發(fā)現(xiàn)，在硝酸甘油大鼠偏頭痛模型中，NF-κB在三叉神經(jīng)尾核和三叉神經(jīng)分布的硬腦膜處有增強(qiáng)表達(dá)，提示核因子-kappaB在偏頭痛神經(jīng)源性炎癥的產(chǎn)生和偏頭痛發(fā)作的過(guò)程中起著重要的作用，值得我們深入

3、研究。 環(huán)氧合酶2（cyclooxygenase，COX-2）為誘導(dǎo)型環(huán)氧合酶，又稱“炎癥反應(yīng)基因”，在正常生理狀態(tài)下表達(dá)量很小，在受到刺激后便迅速合成表達(dá)，參與炎癥相關(guān)病理生理過(guò)程。COX-2是被NF-κB調(diào)控的轉(zhuǎn)錄物質(zhì)。應(yīng)用COX-2抑制劑可以通過(guò)抑制中樞致敏作用達(dá)到終止偏頭痛的作用。 目的: 本研究將從ROCKⅡ、核因子-kappaB及COX-2著手，首先建立硝酸甘油型實(shí)驗(yàn)性偏頭痛大鼠模型，并同步設(shè)立生理鹽

4、水對(duì)照組，通過(guò)檢測(cè)腦干組織中上述各蛋白的表達(dá)，并比較它們?cè)诎l(fā)作期與間歇期的表達(dá)變化，以初步探討ROCKⅡ、NF-kappaB通路及COX-2在偏頭痛發(fā)病過(guò)程中的作用。 方法: 1.動(dòng)物分組及處理：采用清潔級(jí)成年雌性Sprague-Dawley（SD）大鼠為實(shí)驗(yàn)對(duì)象，隨機(jī)分為模型組和對(duì)照組。模型組依Tassorelli法皮下注射硝酸甘油10mg（2ml）/kg，每周1次，共5周；對(duì)照組以生理鹽水代替硝酸甘油皮下注射，同步進(jìn)

5、行。 2.受試動(dòng)物于第5次造模后2小時(shí)（發(fā)作期）或第4天（間歇期）分別斷頭處死，取大鼠腦干組織，液氮內(nèi)保存。 3.Western-Blot法檢測(cè)大鼠腦干組織ROCKⅡ、核因子-kappaB及COX-2蛋白的表達(dá)。 結(jié)果: 1.模型組發(fā)作期大鼠腦干組織中ROCKⅡ蛋白、核因子-kappaBp65、COX-2蛋白的表達(dá)均高于各自的間歇期和對(duì)照組（p<0.05）；模型組間歇期與對(duì)照組間表達(dá)無(wú)明顯差異（p>0.0

6、5）。 2.模型組間歇期與模型組發(fā)作期ROCKⅡ蛋白變化量與NF-κBp65蛋白變化量呈低度負(fù)相關(guān)（r=-0.0040，p<0.05），而NF-κBp65蛋白的變化量與COX-2蛋白的變化量呈顯著正相關(guān)（r=0.5098，p<0.05）。 結(jié)論: 1.ROCKⅡ蛋白、COX-2蛋白表達(dá)的上調(diào)及NF-κB的活化可能偏頭痛的發(fā)生有關(guān)。 2.偏頭痛的發(fā)生中，COX-2蛋白的表達(dá)上調(diào)可能受核因子-kappaB蛋白